自帶綠色熒光的細胞是否可以用annexin V fitc做流

2021-04-01 11:16:00 字數 1863 閱讀 6629

1樓:匿名使用者

不能,可以用annexin v-pe或者其他方法,比如anti-active caspase 3-pe/apc 等

怎麼看annexin v-fitc細胞流式測凋亡**

2樓:謝志強啊啊

在二維散點圖上,pi 和 annexin v 分別是x和y軸。一般認為pi單染

的細胞是已經死亡的細胞,annexin v 單染的細胞是凋亡早期的細胞,而雙染是凋亡中期的。

需要在散點圖上先畫出4個象限,位置根據無染色的陰性細胞先定出左下象限。

annexin v是一種檢測細胞凋亡的試劑,在正常細胞中,磷脂醯絲氨酸只分布在細胞膜脂質雙層的內側,細胞發生凋亡早期,膜磷脂醯絲氨酸(ps)由脂膜內側翻向外側。

請問流式細胞儀檢測細胞凋亡的原理是什麼?

3樓:匿名使用者

一、原理

在正常細胞中,磷脂醯絲氨酸(ps)只分布在細胞膜脂質雙層的內側,而在細胞凋亡早期,細胞膜中的磷脂醯絲氨酸(ps)由脂膜內側翻向外側。annexin v是一種分子量為35~36kd的ca2+依賴性磷脂結合蛋白,與磷脂醯絲氨酸有高度親和力,故可通過細胞外側暴露的磷脂醯絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此annexin v被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。

將annexin v進行熒光素(egfp、fitc)標記,以標記了的annexin v作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發生。

碘化丙啶(propidium iodide, pi)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但對凋亡中晚期的細胞和死細胞,pi能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將annexin v與pi匹配使用,就可以將處於不同凋亡時期的細胞區分開來。

二、注意事項

1、必須活細胞檢測,不能用能破壞細胞膜完整性的固定劑和穿透劑固定或穿膜。

2、特殊細胞的染色方法:在消化或吹打時,有些細胞(如神經元細胞)很容易受到損傷,導致晚期凋亡或壞死比例非常高,不能反映真實結果。實驗的解決方法:

先低速離心,吸取細胞培養板中的液體,留少許液體,加入適量pi和annexin-v染色10min後,將漂浮細胞吸至離心管中,離心洗滌兩次,用pbs漂洗貼壁細胞兩次,加胰酶消化後將細胞懸液移至另一離心管中,離心洗滌,再與漂浮細胞合併後上流式細胞儀檢測。應用該法可降低晚期凋亡和壞死比例,增加早期凋亡細胞比例。

3、由於annexin-v為鈣離子依賴的磷脂結合蛋白,只有在鈣離子存在的情況下與ps的親和力才大,因而在消化細胞時,建議一般不採用含edta的消化液。

4、必須設定陰性對照和補償對照(分別單染)。

4樓:匿名使用者

最常用的是annexinv /pi雙染檢測凋亡,凋亡的細胞膜上的ps(磷脂醯絲氨酸蛋白)會從膜內轉移到膜外,我們利用annexinv抗體即可與之結合,有結和得說明這個細胞有凋亡,pi是用來區分死活細胞的,一般認為annexinv陽性,pi陰性的那群細胞即為早期凋亡細胞。

annexinv-fitc/pi流式細胞術橫縱座標什麼意思

5樓:匿名使用者

annexinv-fitc/pi流式細胞術橫

抄縱座標什麼bai意思

q1:(annexinv-fitc)-/pi+,此區域的du細胞為壞死細胞。也可能有少數zhi的晚

期凋亡細胞在其中,甚dao至機械損傷的細胞也包含其中。

q2: (annexinv+fitc)+/pi+,此區域的細胞為晚期凋亡細胞。

q3:(annexinv-fitc)+/pi-,此區域的細胞為早期凋亡細胞。

q4:(annexinv-fitc)-/pi-,此區域的細胞為活細胞。

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