1樓:匿名使用者
中性粒細胞(pmn)是機體防禦系統的主要組成部分,能吞噬和殺滅多種致病原。致病原與血清中的特異性抗體(igg)結合後,通過igg的fc部分與pmn表面的受體——fcγriii(cd16b)相結合,從而被吞噬。fcγriii有a、b兩種型別,fcγriiia(cd16a)是一種跨膜糖蛋白,pmn表面的fcγriiib(cd16b)是一種糖肌醇磷脂蛋白(gpi-錨蛋白)[1]。
近年發現陣發性睡眠性血紅蛋白尿症(pnh)患者在血細胞表面缺失各種特異的gpi-錨蛋白,cd16b正是這類蛋白之一。為**pmn表面cd16b的缺失與pmn釋放氧自由基殺菌功能的關係,將我們的研究報告如下。
材料和方法
1 標本採集 正常人外周血取自****血庫正常獻血者,正常骨髓取自****胸外科手術患者的肋骨,pnh患者按2023年全國溶血性貧血會議擬定的診斷標準,並經流式細胞儀免疫熒光法檢測cd59標記率進一步確診。
2 中性粒細胞的分離 新鮮的外周血或骨髓,用肝素抗凝,經淋巴細胞分離液分離,去除淋巴細胞和單個核細胞,用右旋糖酐(dextran,分子量=7~11 萬) 沉降和低滲法去除紅細胞,得到純淨的中性粒細胞。用臺盼藍染色法檢查細胞活力,須保證細胞存活率大於95%。
3 間接免疫熒光法檢測cd16 取1×106個細胞,懸浮於100μl 2% bsa中,室溫封閉30分鐘,加 cd16單克隆抗體(immunotech sa公司產品),在室溫作用30分鐘後,用pbs洗滌2次,再懸浮於100μl 2%bsa中,加fitc 標記的羊抗鼠igg(gibco公司產品)室溫暗染20分鐘後洗去二抗。用500μl pbs懸浮細胞,用流式細胞儀檢測cd16 標記率。
4 中性粒細胞功能測定 佛波醇酯(pma,sigma產品,用dmso溶解,配製成1mg/ml,儲存於-20°C,臨用前稀釋)能啟用中性粒細胞,使之釋放活性氧,其中o-2*和h2o2能與化學發光劑luminol(3-氨基苯二甲醯肼,北京化工廠)反應而發光。用lkb-1250發光儀(luminometer)檢測。正常人和pnh患者中性粒細胞,製備成細胞懸液(107 /ml)與 100nmol/l pma 反應,37°C15分鐘,置於冰上終止反應,取含1×105 細胞的啟用液加入到1ml 0.
1nmol/l 的luminol 溶液中,立即測定發光值,每一數值測定3次以上, 取平均值。取正常人的不同細胞數,測定發光值,結果顯示發光值與細胞數有良好的線性關係,說明此方法具有可靠性 (附圖)。
附圖 細胞數與發光值的線性關係
5 細胞培養 以 1×106個細胞/ml的密度接種pmn於imdm培養基(含10%自身血清),37°C、5% co2分別培養12,16,20小時。
6 細胞形態學觀察 不同培養時間的細胞用瑞氏染色,光學顯微鏡下觀察。
7 dna含量分析 取細胞1×106,pbs洗2遍,以70%冷乙醇(4°C)固定12小時以上,用pbs洗去乙醇,加入0.5ml檸檬酸-磷酸緩衝液(ph 7.8)室溫作用5分鐘,離心後以pbs重懸細胞,加入 rnasea (終濃度60μg/ml)37°C作用30分鐘,再加入碘化乙錠(pi,終濃度50μg/ml)4°C暗染30分鐘,以染細胞內總dna,用流式細胞儀分析正常細胞和凋亡細胞,計算凋亡率。
小鼠中性粒細胞做ihc 選擇哪幾個指標
2樓:南京金益柏生物科技****
小鼠中性粒細胞做ihc,我建議樓主呢,還是查詢文獻,一般文獻講解是比較詳細的,也是比較清楚的。
怎樣分離小鼠外周血中性粒細胞
3樓:風雪中的緣
外周血中單個核細胞和單核細胞,其體積、形態和密度與其他細胞不同。淋巴細胞分離液是一種密度介於1.075∽1.090之間而近似於等滲的溶液。
轉基因小鼠和knockinout小鼠有什麼區別
轉基因來是過表達原 源有基因或者新表達原來沒有的基因。knockin是改變原有基因的表達,基本上是做突變,但是不破壞原有基因的完整性,但是改變該基因的功能。而knockout是敲除該基因,即是原有基因失活,其中又有保留原基因部分完整性和 不保留兩種,保留完整性通過剔除一部分序列但是保留該基因in f...
轉基因小鼠和knockin out小鼠有什麼區別
轉基因小鼠和bai基因敲入小鼠du區別在於基因方zhi面的不同。dao基因敲除是自80年代 回末以來發答展起來的一種新型分子生物學技術，是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用dna同源重組原理，用設計的同源片段替代靶基因片段，從而達到基因敲除的目的。隨著基因...
18度灰和中性灰是意思嗎，18度灰和中性灰是一個意思嗎
是一個意思。中性灰顏色的反射度是18 中性灰在rgb色彩模式下，指的是r g b 1 1 1 即紅綠藍三色數值相等，即為中性灰。當r g b 128，被稱作 絕對中性灰 灰度的通常表示方法是百分比，範圍從0 到100 photoshop中只能輸入整數，在illustrator和golive允許輸入小...