1樓:想自由
方法名稱:
玻璃酸酶的測定—玻璃酸酶測定法
應用範圍:62616964757a686964616fe59b9ee7ad9431333361303132
本方法採用玻璃酸酶測定法測定玻璃酸酶的效價。
本方法適用於玻璃酸酶。
方法原理:
精密稱取本品適量,加冷的水解明膠稀釋劑製成每1ml中約含1.5個單位的溶液,照玻璃酸酶測定法,測定玻璃酸酶的效價。
試劑:1. 醋酸-醋酸鉀緩衝液
2. 磷酸鹽緩衝液
3.水解明膠
4. 水解明膠稀釋劑
5. 血清貯備液
6. 血清溶液
7. 玻璃酸鉀貯備液
8. 玻璃酸鉀溶液
儀器裝置:
可見分光光度計
試樣製備:
1. 醋酸-醋酸鉀緩衝液
取醋酸鉀14g與冰醋酸20.5ml,加水使成1000ml。
2. 磷酸鹽緩衝液
取磷酸二氫鈉2.5g、無水磷酸氫二鈉1.0g與氯化納8.2g,加水使成1000ml。
3.水解明膠
取明膠50g,加水1000ml,在121°C加熱90分鐘,然後冷凍乾燥。
4. 水解明膠稀釋劑
取磷酸鹽緩衝液與水各250ml,加水解明膠330mg搖勻,在0-4°C儲存。如溶液不發生混濁,可繼續使用。
5. 血清貯備液
取新鮮牛血清或凍幹牛血清(先用水溶解並稀釋至標示量體積)1份,加醋酸-醋酸鉀緩衝液9份稀釋,再以4mol/l鹽酸溶液調節ph值至3.1,放置18-24小時後再用。在0-4°C儲存,應可用30日。
6. 血清溶液
血清貯備液中血清總固體(取牛血清適量,置裝有潔淨沙粒並在105°C乾燥至恆重)在8%左右著,取1份,用醋酸-醋酸鉀緩衝液3份;血清總固體在5%左右著,取一份,用醋酸-醋酸鉀緩衝液2份稀釋。臨用時配製。
7. 玻璃酸鉀貯備液
取預先經五氧化二磷減壓乾燥48小時的玻璃酸鉀,加水製成每1ml中含0.5mg的溶液。在0°C以下儲存,可應用30日。
8. 玻璃酸鉀溶液
取玻璃酸鉀貯備液一份,用磷酸鹽緩衝液1份稀釋。臨用時配製。
9. 供試品溶液的製備
按估計單位精密稱取本品適量,加冷的水解明膠稀釋製成每1ml中約含1.5個單位的溶液,作為供試品溶液。臨用時配製。
10. 對照品溶液的製備
精密稱取玻璃酸酶對照品適量,加冷的水解明膠稀釋製成每1ml中約含1.5個單位的溶液,作為對照品溶液。臨用時配製。
注:「精密稱取」係指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一。「精密量取」係指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。
操作步驟:
1.供試品的測定
取大小相同的試管6支,依次加供試品溶液0.20ml,0.30ml,0.
40ml,各2支;再依次相應加入水解明膠稀釋液0.30ml,0.20ml,0.
10ml,每隔30秒鐘順序加入玻璃酸鉀溶液0.50ml,使每管的總體積為1.00ml,搖勻,置37°C±0.
5°C水浴中;每管準確保溫30分鐘後,每隔30秒順序取出,立即順序加入血清溶液4.0ml,搖勻,在室溫放置 30分鐘,搖勻,在640nm的波長處測定吸光度,同時以磷酸鹽緩衝液0.50ml代替玻璃酸鉀溶液,加水解明膠稀釋液0.
50ml,搖勻,按上述方法自「置37°C±0.5°C水浴中」起同法操作,作為空白,計算,即得。
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