1樓:匿名使用者
實驗目的是什麼~檢測做完實驗的該細胞蛋白量?可以啊~反正wb也是要裂解細胞取上清蛋白制樣的~只要你目的蛋白沒降解就行~
做wb,直接收集細胞沉澱凍起來可以嗎
2樓:聽風
做wb,可以直接收集細胞沉澱凍起來,以備下一步實驗所用。
蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即western blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。
通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的資訊。比如加藥物處理的貼壁細胞總蛋白的提取。
由於受藥物的影響,一些細胞脫落下來,所以應收集培養液中的細胞。以下是培養液中細胞總蛋白的提取:
1 將培養液倒至15ml離心管中,於2500rpm離心5min。
2棄上清,加入4ml pbs並用槍輕輕吹打洗滌,然後2500rpm離心5min。棄上清後用pbs重複洗滌一次。
3用槍洗幹上清後,加100 μl裂解液(含pmsf)冰上裂解30min,裂解過程中要經常彈一彈以使細胞充**解。
4將裂解液與培養瓶中裂解液混在一起4°C、12000rpm離心5min,取上清分裝於0.5ml離心管中並置於-20°C儲存。
細胞實驗pcr和wb一指標什麼意思? 20
3樓:帥帥哥
胞水平進行wb和rt-pcr所需多少細胞,一般用多大的板子培...
:whole blood 全血(即未經任何方式分部分離的血液)
western blot,「western免疫印跡法」.是將蛋白質轉移到膜上,然後利用抗體進行檢測.對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測.
rt-pcr:
reversi transcriptase polymerase chain reaction逆轉錄pcr(逆轉錄聚合酶鏈反應)
起始模板是rna的pcr反應,需要一個起始的逆轉錄酶以生成dna模板,某些熱穩定性聚合酶具有適當的逆轉錄酶活性.較常用的是先作逆轉錄後,將逆轉錄酶滅活或純化逆轉錄產物,再作常規pcr反應.
ihc:
inner hair cell 內毛細胞(規則地分佈於基底膜之上、靠近耳蝸中心的一列毛細胞)
immunohistochemistry 免疫組織化學,利用抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及定量的研究.