1樓：
western blot中蛋白樣品調節濃度有很多方法 先檢測出各個蛋白樣品的濃度，根據體積通過不同單位的loading buffer將樣品稀釋成不同的體積，即可以保證各個蛋白樣品濃度一致 或者在樣品裂解的時候，用裂解液或者pbs去稀釋蛋白樣品，達到調節濃度的。
有用細胞培養液的上清做western的嗎
2樓：匿名使用者
沒有影響,最後讀值時的吸收值和你細胞培養液顏色又不是一個步驟
為什麼western blot結果中，蛋白質檢測分子量會與計算大小不同
3樓：匿名使用者
western blot檢測的結果與理論計算值有差異是非常正常的事情
western blot檢測最重要的意義在於目的蛋白在某細胞或組織中表達情況的定性。而目的蛋白檢測的大小取決於目的蛋白在sds-page的結果，也就是說如果目的蛋白在sds-page上檢測結果是偏大的，那麼在western blot轉膜後也會是偏大的，這和目的蛋白的結構（糖基化修飾），，組成等等都有關係。所以只是一個相對的分子量的結果。
要精確檢測目的蛋白的分子量結果需要做（）檢測
細胞培養液中蛋白用elisa怎麼檢測
4樓：人蔘__苦短
是細胞分泌的蛋白的話，直接在培養皿中鋪入一定量的細胞，培養3天，細胞達到80-90%時，加藥的時候換無血清培養基，作用完後收集細胞培養上清液，3000rpm,4℃ 離心10min，取上清液。elisa檢測時，不同因子的稀釋度，要事先做個預實驗確定。對照組為新鮮培養液。
5樓：南京金益柏生物科技****
一般來說檢測細胞內的蛋白質需要破碎細胞，非結構蛋白較易提取，破碎細胞後離心取上清即可。而結構性蛋白則需破碎脂膜提取蛋白，具體方法可參照膜蛋白提取的相關文獻。提取的總蛋白需定量，然後以每mg或g的蛋白的相同濃度稀釋後用於測定。
提取時注意要保持低溫及加入必要蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)。
檢測細胞上清中分泌性蛋白的表達一般刺激多長時間
6樓：匿名使用者
實時熒光定量pcr檢測mrna的表達,然後westernblot檢測蛋白表達量.
首先你確定拿到了這兩種細胞系，通過pcr反應證明一個是野生型一個是突變型，即snp。然後用試劑盒提取rna，設計引物，採用半定量或絕對定量的方法，測定mrna表達水平；然後另取細胞裂解，提取總蛋白，用特異性抗體檢測蛋白表達量。
我用flag單抗做western blot， 檢測不到含flag標籤的目的蛋白，你覺得是為什麼呢？
7樓：匿名使用者
這個flag標籤抗體能檢測到其他帶flag標籤的蛋白嗎？
例如空載對照。如果空載也不行，那基本抗體就歇了。
如果有，就要看flag標籤是不是正確表達了，如果表達不正確也會影響到檢測的。
怎樣提取上清液用western blot測定上清液中細胞分泌的蛋白
8樓：匿名使用者
這個還是有難度的，一般上清裡分泌的目的蛋白很少。所以首先建議您用無血清培養基培養你的細胞。 收集上清比較簡單，直接把上清收到離心管裡，離心一下去掉細胞什麼的，再用超濾管濃縮一下上清，不然的話上清還是太稀了。。
請問實驗室的常用技術pcr,qpcr,rtpcr，western blot 分別是為了什麼目的進行的實驗？
9樓：匿名使用者
pcr 常用就是擴基因，提完rna後反轉啊，那你擴來基因用做什麼就需要你來看了。
菌落pcr，也是擴，放大數目，好驗證。
qpcr是熒光染料，做定量，一般是看錶達，就是基因的表達情況，基因層面
rtpcr是半定量，相對上面的定量來說沒有完全量化，相當於是質化，也能看出問題
western 是做蛋白的
western blot蛋白質處理要用到超聲波呢？超聲波在裡面起到什麼作用呢？有可以替代的方法嗎？
10樓：匿名使用者
wb是從電泳轉膜開始算起的，然後block，孵育一抗二抗，**，不需要超聲
在前面的生化過程中，獲得細胞的裂解液時，是要用到超聲破碎的，適用於少量的細胞，與triton x-100配合使用可以有效的裂解細胞，而不破壞細胞內的蛋白。這一部分你可以參考生化實驗手冊。另外，壓力破碎可以代替超聲，去汙劑（比如triton x-100）配合針筒抽提，都可以，前者可以大量破碎，後者只適用於小量破碎
11樓：匿名使用者
應該是起催化作用吧，找找生化學或者超聲生物學方面的應用。
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