1樓:霓若小爾
革蘭染色步驟中,
乾燥:塗片後在室溫下自然乾燥,也可在酒精燈上略加溫,使之迅速乾燥,但回勿靠近火答焰。
固定:常用高溫進行固定。即手持載玻片一端,標本面朝上,在燈的火焰外側快速來回移動3~4次,共約3~4秒。
要求玻片溫度不超過60℃,以玻片背面觸及手背**不覺過燙為宜,放置待冷後染色。
這是兩個不同的概念以及操作,是不能混淆的,不過固定如用加熱乾燥,固定與乾燥可合為一步。
2樓:匿名使用者
本人理解啊,乾燥是要用吹風機或者酒精燈將載玻片烘乾,固定呢,就是要將被測物固定在玻片上。乾燥的目的是把水去除,固定是將被測附著在玻片上。
革蘭染色時乾燥和固定的目的是什麼
3樓:維尼之稻草人
固定目的
① 殺死微生物,固定其細胞結構;
② 保證菌體能牢固地粘附在載玻片上,以免水洗時被水沖掉;
③ 改變菌體對染料的通透性,一般死細胞原生質容易著色。
4樓:夜の月華
防止用酒精或丙酮脫色時把細菌給沖走了
5樓:匿名使用者
溼不拉嘰的你往上面滴油的時候會不會覺得不爽啊?
什麼?你們看它不用油鏡?大哥,頂禮膜拜了
革蘭氏染色必須過火固定嗎,自然幹可以嗎?
6樓:環凱微生物科技
固定的目的有兩抄點,襲1、讓菌膜貼附在玻片表面,在後期染色和沖洗的時候不易被沖掉;2、使染色的微生物形態固定,甚至使微生物失活。如果不進行固定再做一些需要加熱的芽孢染色時沖洗後就都沒有了。另外有些組織抹片脂肪含量較高不適合使用火焰固定,可以選擇甲醇固定。
在革蘭氏染色中,固定的目的之一是殺死菌體,這與然死亡的菌體進行染色有何不同?
7樓:香之道
自然死亡的菌體本身已經部分自溶,結構已經改變。固定殺死細菌時細菌結構是保持死亡時的狀態的,故不影響。好比拿年輕的死人做實驗,你就不能拿自然老死的做,身體已經不是年輕人那樣的身體了。
這個例子不好,將就吧。
革蘭氏染色的步驟和原理
8樓:鵝子野心
操作步驟:
1 .塗片
將培養的不同菌分別作塗片(注意塗片切不可過於濃厚),乾燥、固定。固定時通過火焰1一2 次即可,不可過熱,以載玻片不燙手為宜。
2 .染色
( 1 )初染加草酸鉸結晶紫一滴,約一分鐘,水洗。
( 2 )媒染滴加碘液衝去殘水,並覆蓋約一分鐘,水洗。
( 3 )脫色將載玻片上面的水甩淨,並襯以白背景,用95 %酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現紫色時為止,約20 一30 秒鐘,立即用水衝淨酒精。
( 4 )復染用番紅液染1 一2 分鐘,水洗。
( 5 )鏡檢乾燥後,置油鏡觀察.革蘭氏陰性菌呈紅色,革蘭氏陽性菌呈紫色。以分散開的細菌的革蘭氏染色反應為準,過於密集的細菌,常常呈假陽性。
( 6 ) 同法在一載玻片上以大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合製片,作革蘭氏染色對比。
革蘭氏染色的關鍵在於嚴格掌握酒精脫色程度,如脫色過度,則陽性菌可被誤染為陰性菌;而脫色不夠時,陰性菌可被誤染為陽性菌。此外,菌齡也影響染色結果,如陽性菌培養時間過長,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈陰性反應。
原理:革蘭氏染色反應是細菌分類和鑑定的重要性狀。它是1884 年由丹麥醫師gr 二創立的。
革蘭氏染色法(gram stain )不僅能觀察到細菌的形態而且還可將所有細菌區分為兩大類:染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌,用g+表示:染色反應呈紅色(復染顏色)的稱為革蘭氏陰性細菌,用g 一表示。
細菌對於革蘭氏染色的不同反應,是由於它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要是由膚聚糖形成的網狀結構組成的,在染色過程中,當用乙醇處理時,由於脫水而引起網狀結構中的孔徑變小,通透性降低,使結晶紫一碘複合物被保留在細胞內而不易脫色,因此,呈現藍紫色;革蘭氏陰性細菌的細胞壁中膚聚糖含量低,而脂類物質含量高,當用乙醇處理時,脂類物質溶解,細胞壁的通透性增加,使結晶紫一碘複合物易被乙醇抽出而脫色,然後又被染上了復染液(番紅)的顏色,因此呈現紅色。
革蘭氏染色需用四種不同的溶液:鹼性染料(basic dye )初染液;媒染劑(mordant ) ;脫色劑( decolorising agent )和復染液(counter stain )。鹼性染料初染液的作用象在細菌的單染色法基本原理中所述的那樣,而用於革蘭氏染色的初染液一般是結晶紫(crystal violet )。
媒染劑的作用是增加染料和細胞之間的親和性或附著力,即以某種方式幫助染料固定在細胞上,使不易脫落,碘(iodine ) 是常用的媒染劑。脫色劑是將被染色的細胞進行脫色,不同型別的細胞脫色反應不同,有的能被脫色,有的則不能,脫色劑常用95 %的酒精(ethanol )。復染液也是一種鹼性染料,其顏色不同於初染液,復染的目的是使被脫色的細胞染上不同於初染液的顏色,而未被脫色的細胞仍然保持初染的顏色,從而將細胞區分成g +和g 一兩大類群,常用的復染液是番紅。
9樓:林與潘
一、 目的:在細胞發放之前,利用標準的革蘭氏染色法對即將發放的細胞懸液進行檢測,判斷細胞懸液中是否含有革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌。
二、 原理:
10樓:張鈺濤
步驟:包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟。
原理:染色後細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法,2023年由丹麥醫師gram創立。未經染色之細菌,由於其與周圍環境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難觀察。染色後細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。
革蘭氏染色屬復染法。
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法,這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭(hans christian gram,2023年-2023年)於2023年所發明,最初是用來鑑別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關係。
未經染色之細菌,由於其與周圍環境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難觀察陽性紫色陰性紅色。染色後細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。
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