1樓:賴登聞
以rna為模板,在反轉錄酶催化下轉錄為雙鏈dna的過程。
反轉錄過程由反轉錄酶催化,該酶也稱依賴rna的dna聚合酶(rddp),即以rna為模板催化dna鏈的合成。合成的dna鏈稱為與rna互補dna(cdna)。反轉錄酶存在於一些rna病毒中,可能與病毒的惡性轉化有關。
人類免疫缺陷病毒(hiv)也是一種rna病毒,含有反轉錄酶。在小鼠及人的正常細胞和胚胎細胞中也有反轉錄酶,推測可能與細胞分化和胚胎髮育有關。
大多數反轉錄酶都具有多種酶活性,主要包括以下幾種活性。①dna聚合酶活性;以rna為模板,催化dntp聚合成dna的過程。此酶需要rna為引物,多為色氨酸的trna,在引物trna3′-末端以5′→3′方向合成dna。
反轉錄酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此沒有校正功能,所以由反轉錄酶催化合成的dna出錯率比較高。②rnase h活性;由反轉錄酶催化合成的cdna與模板rna形成的雜交分子,將由rnase
h從rna5′端水解掉rna分子。③dna指導的dna聚合酶活性;以反轉錄合成的第一條dna單鏈為模板,以dntp為底物,再合成第二條dna分子。除此之外,有些反轉錄酶還有dna內切酶活性,這可能與病毒基因整合到宿主細胞染色體dna中有關。
反轉錄酶的發現對於遺傳工程技術起了很大的推動作用,目前它已成為一種重要的工具酶。用組織細胞提取mrna並以它為模板,在反轉錄酶的作用下,合成出互補的dna(cdna),由此可構建出cdna文庫(cdna library),從中篩選特異的目的基因,這是在基因工程技術中最常用的獲得目的基因的方法。
反轉錄的簡要過程表示如下:
反轉錄酶的作用是以dntp為底物,以rna為模板,trna(主要是色氨酸trna)為引物,在trna3′桹h末端上,按5′→3′方向,合成一條與rna模板互補的dna單鏈,這條dna單鏈叫做互補dna(complementary dna,
cdna),它與rna模板形成rnadna雜交體。隨後又在反轉錄酶的作用下,水解掉rna鏈,再以cdna為模板合成第二條dna鏈。至此,完成由rna指導的dna合成過程。
2樓:神話洛
這個發生在生物的dna生成中,以rna為模板合成dna是反轉錄,而以dna為模板就生成rna.!
3樓:匿名使用者
反轉錄就是指在反轉錄酶的作用下,以rna為模板合成dna的過成。因為dna為模板合成rna這個過成叫轉錄,所以對於它的逆過成就叫反轉錄了。
4樓:秒懂百科
反轉錄:以rna為模板,通過反轉錄酶,合成dna的過程
反轉錄問題!急急急@!!!
5樓:匿名使用者
如果你是用反轉錄後的cdna跑電泳,出現好多條帶或彌散狀是正常的,因為你提取的rna不可能是完整的一條鏈,而隨機引物和特異引物擴增的時候是有肯能把大小不同的rna同時進行擴增的。
你可以用你的目的引物,用反轉錄第一鏈進行擴增,看看能不能得到目的片段。
6樓:秒懂百科
反轉錄:以rna為模板,通過反轉錄酶,合成dna的過程
請問做反轉錄有哪些注意事項嗎?我做完反轉錄後跑pcr什麼條帶都沒有,可覺得rna質量沒問題,幫幫忙了
7樓:匿名使用者
rna質量沒問題,按照試劑盒說明書進行反轉錄操作就行了
可以用actin為內參擴一下,如果擴出來了,就是你自己設計的引物問題,得重新設計引物,如果擴不出來,就是你反轉錄cdna的質量問題了,用其他的反轉錄試劑盒試試
8樓:匿名使用者
避免rnase的汙染,衝提取rna開始就應該注意這個問題;
反轉錄結束後一般選擇一個高表達的基因做pcr,如actin,檢測反轉錄有沒有成功。
反轉錄酶也要注意保護好,避免失活,在加入rtase的時候,要注意等到前一步驟的溫度降下來後才能加入。
9樓:匿名使用者
避免rnase的汙染,建議用trnsol(trizol)來提取。提rna最大的要訣就是快。畢竟要創造一個絕代無rnase的環境是不可能,快,就能減少rnase的影響時間。
做反轉錄是用試劑盒還是自己配試劑?自己配製是否使用了rnase抑制劑?是否有做陽性對照?
如果對照有訊號,而目標產物無,很大可能是引物有問題。否則,可以使用下一步法(one step rt-pcr),這樣能減少操作步驟。
差異顯示反轉錄pcr是怎麼回事
請問什麼是反轉劇?
10樓:錯亂de時間
一般來說 反轉劇都會有兩到五個出乎意料的劇情轉折 而且比電影還要短 每集在20到40分鐘之間不等 內容包括愛情 懸疑 恐怖等 都是由韓國比較知名的藝人出演 我個人比較喜歡看這樣的短短的 但又十分精彩的劇集
11樓:璇茜緣
12樓:
就是結局出乎意料的。
13樓:漆雕景明賈雨
結果出人意料的,我很喜歡看反轉劇啊,有點嚇人
請問高人,到底是怎么回事,請問高人,到底是怎麼回事?
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請問如果打雷下雨但是風是暖的怎么回事
打雷下雨時,風會經過一些潮溼且溫度高的地方,而且有可能是你的臉部,身體溫度太低,這樣風吹在你臉上也會感受到溫暖的。如果打雷下雨,風是暖的,是因為天氣很熱。天氣悶熱,所以風是暖的。如果打雷下雨的時候天氣涼爽風也是涼爽的。打雷下雨是因為,雲彩的聚集層後也是冷熱風交替的結果,風是暖的,說明冷空氣的力量小。...
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