1樓:油條小新
pcr反應的基本成分包括:模板dna(待擴增dna)、引物、4種脫氧核苷酸(dntps)、dna聚合酶和適宜的緩衝液。類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:1模板dna的高溫變性:模板dna經加熱至93°C左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;2模板dna與引物的低溫退火(復性):
模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55°C左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;3引物的適溫延伸:dna模板--引物結合物在taqdna聚合酶的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna 鏈互補的半保留複製鏈重複迴圈變性-退火-延伸三過程,就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2~4分鐘, 2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
(2)pcr的反應動力學: pcr的三個反應步驟反覆進行,使dna擴增量呈指數上升。反應最終的dna 擴增量可用y=(1+x)n計算。
y代表dn**段擴增後的拷貝數,x表示平(y)均每次的擴增效率,n代表迴圈次數。平均擴增效率的理論值為100%,但在實際反應中平均效率達不到理論值。 反應初期,靶序列dn**段的增加呈指數形式,隨著pcr產物的逐漸積累,被擴增的dna 片段不再呈指數增加,而進入線性增長期或靜止期, 即出現「停滯效應」 ,這種效應稱平臺期數、pcr 擴增效率及dna聚合酶pcr的種類和活性及非特異性產物的竟爭等因素。
大多數情況下,平臺期的到來是不可避免的。
(3)pcr擴增產物 :可分為長產物片段和短產物片段兩部分。短產物片段的長度嚴格地限定在兩個引物鏈5'端之間,是需要擴增的特定片段。
短產物片段和長產物片段是由於引物所結合的模板不一樣而形成的,以一個原始模板為例,在第一個反應週期中, 以兩條互補的dna為模板,引物是從3'端開始延伸, 其5'端是固定的,3' 端則沒有固定的止點,長短不一,這就是「長產物片段」。進入第二週期後,引物除與原始模板結合外,還要同新合成的鏈(即「長產物片段」)結合。引物在與新鏈結合時, 由於新鏈模板的5'端序列是固定的, 這就等於這次延伸的片段3'端被固定了止點, 保證了新片段的起點和止點都限定於引物擴增序列以內、形成長短一致的「短產物片段」。
不難看出「短產物片段」是按指數倍數增加, 而「長產物片段」則以算術倍數增加, 幾乎可以忽略不計, 這使得pcr的反應產物不需要再純化,就能保證足夠純dn**段供分析與檢測用。
pcr技術和 基因工程的優缺點分別是什麼
2樓:仁昌居士
pcr技術的優點是快速在體外拷貝所需要的dn**段。
pcr技術的缺點是技術含量高,迴圈過程複雜,需要一定的器材。
基因工程的優點是打破了常規育種難以突破的物種之問的界限,可以使原核生物與真核生物之間、動物與植物之間,甚至人與其他生物之間的遺傳資訊進行重組和轉移。人的基因可以轉移到大腸桿菌中表達,細菌的基因可以轉移到植物中表達。
基因工程的缺點是可能引起生物安全和生物變異,導致生物體系紊亂。
3樓:匿名使用者
嚴格地說,pcr技術是屬於基因工程中的一環節。pcr技術的優點:快速在體外拷貝所需要的dn**段。
缺點:技術含量高,需要一定的器材。基因工程的優點:
定向改造生物性狀,生產人們所需的產物。缺點:可能引起生物安全等問題。
基因工程中pcr技術都分哪幾種,分別都有什麼作用,有什麼區別
4樓:匿名使用者
這個問題太大了
復,5分完全制不夠懸賞的.
各種pcr技術bai都是在基
礎的dutaq酶zhipcr的基礎上發展而來的,利用改dao進的pcr反應進行某種檢測或者擴增.
你不需要掌握所有,他們分散在各個領域,很多人在他們的工作領域裡一生也接觸不到幾種
實時定量pcr (q-rt-pcr).在pcr體系中加入syber green染料或者探針,利用pcr的指數擴增效應來檢測含量極低的dna或rna
5樓:56守侯
用到哪種學哪種吧,即使都照全你也不能都學全啊,pcr太多種了,都用於不同的實驗的
關於pcr、基因工程的問題
6樓:匿名使用者
你合成引物的時候把酶切位點加在引物前面就行,你要用哪個酶切就加哪個的酶切位點。
7樓:匿名使用者
把酶切位點序列加在你的pcr引物前端就行
什麼是基因工程，基因工程是什麼？
基因工程也就是dna重組技術。它是指在體外通過人工 剪下 和 拼接 等方法，對各種生物dna分子進行改造和重新組合，然後匯入微生物或真核細胞內進行無性繁殖，使重組基因在受體細胞內表達，產生出人類需要的基因產物，或者改造 創造新的生物型別。基因工程又稱遺傳工程。但是廣義的遺傳工程涵義比較廣泛，任何採用...
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基因工程藥品的優點,目前基因工程藥物有哪些啊分別有什麼作用
答案c基因工程製藥是製藥行業突起的一支新軍,它最突出的特點是,用基因工程方法獲取的藥品產量比用傳統方法明顯提高。目前基因工程藥物有哪些啊?分別有什麼作用?1 基copy因工程胰島素 胰島素是 糖尿病的特效藥,長期以來只能依靠從豬 牛等動物的胰腺中提取,100kg胰腺只能提取4 5g的胰島素,其產量之...