1樓:匿名使用者
影響轉來化效率的因素很多源,主要有:感受態細胞製備的質量、受體菌生長期(大腸桿菌在對數生長期易產生感受態)、質粒的大小和構型、所用試劑的純度、接種前菌種的保藏方式、冰浴時間(延長冰浴時間可略微提高轉化率)、器皿的清潔度、化合物及無機離子(rb+、mn+、二甲基亞碸能適當提高轉化率)、質粒與細胞個數的比例(質粒與細胞個數比例在1:1以下時,轉化率隨著加入dna的量增加而呈線性增加).
(1)細胞生長狀態和密度.密度不足或過高會使轉化率下降.
(2)質粒dna的質量和濃度.用於轉化的質粒dna應主要是共價閉環dna.轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比,量過多貨體積過大時,轉化率下降.
(3)試劑的質量.
(4)防止雜菌和其他外源dna的汙染.
(5)根據所需質粒dna的特性,設定相應的選擇性培養基進行篩選,有的可能還需進行多補篩選.
如何將一個質粒dna轉入到大腸桿菌感受態細胞中
2樓:萘兒帕爾特管一
不對,通過轉化到感受態
細菌中,不是細胞.感受態的大腸桿菌,可以自己製作也可以通過購買回.之後答將細菌凃到含有抗生素的板子上,長出克隆後挑取單克隆,將單克隆加入含有抗生素的細菌培養基中培養,之後提取質粒,提取質粒可以購買相應的試劑盒,按照試劑盒的說明書操作即可.
質粒是帶有抗性基因的,只有含有該質粒的細菌才能在含有對應抗生素的培養基中存活並增殖,這樣就能確保是你的表達載體質粒.當然為了防止雜菌的汙染,整個過程中最好是無菌操作.而表達載體質粒有可能出現突變等情況,所以可以在提出質粒之後,取少量質粒送測序,來確保序列的無誤.
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