1樓:手機使用者
首先,你的復
質粒必須是穿梭質粒制,否則不可能轉的。
如果是穿梭質粒的話,提取出來直接轉化感受態的農桿菌就好。
步驟:農桿菌感受態細胞的製備
1.挑取少許農桿菌,接種於5ml lb液體培養基 (含50mg/l str)中,28°C、200r/mim培養過夜。
2.取2ml培養物於lb液體培養基 (含50mg/l str) 中繼續培養,直至od800 為0.5左右。
3.將培養物置冰浴中30min,4°C、5000r/min、離心5min,棄去上清液。
4.用10ml冷的0.1mol/l nacl懸浮菌液。
5.4°C、5000r/min,離心5min,棄去上清液。
6.用1ml冷的cacl2 (20mmol/l)懸浮,分裝成50μl/管,液氮中冷凍後至-80°C儲存
不是穿梭載體。
2樓:匿名使用者
都是細菌,為什麼不能。質粒又不那麼認菌的
為什麼不是所有的大腸桿菌都成功轉入了質粒
3樓:匿名使用者
影響轉來化效率的因素很多源,主要有:感受態細胞製備的質量、受體菌生長期(大腸桿菌在對數生長期易產生感受態)、質粒的大小和構型、所用試劑的純度、接種前菌種的保藏方式、冰浴時間(延長冰浴時間可略微提高轉化率)、器皿的清潔度、化合物及無機離子(rb+、mn+、二甲基亞碸能適當提高轉化率)、質粒與細胞個數的比例(質粒與細胞個數比例在1:1以下時,轉化率隨著加入dna的量增加而呈線性增加).
(1)細胞生長狀態和密度.密度不足或過高會使轉化率下降.
(2)質粒dna的質量和濃度.用於轉化的質粒dna應主要是共價閉環dna.轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比,量過多貨體積過大時,轉化率下降.
(3)試劑的質量.
(4)防止雜菌和其他外源dna的汙染.
(5)根據所需質粒dna的特性,設定相應的選擇性培養基進行篩選,有的可能還需進行多補篩選.
為什麼不是所有的大腸桿菌都成功轉入了質粒
影響轉來化效率的因素很多源,主要有 感受態細胞製備的質量 受體菌生長期 大腸桿菌在對數生長期易產生感受態 質粒的大小和構型 所用試劑的純度 接種前菌種的保藏方式 冰浴時間 延長冰浴時間可略微提高轉化率 器皿的清潔度 化合物及無機離子 rb mn 二甲基亞碸能適當提高轉化率 質粒與細胞個數的比例 質粒...
當質粒轉化進大腸桿菌時，通過什麼原理表達目的基因
當質粒來轉化進大腸桿菌時，通過源dna複製原理表達目的基因。baicacl2對特定du的大腸桿菌處理，製備感受zhi態的細菌。dao這些細菌可使每微克超螺旋質粒dna，如一些插入目的dn 段的重組質粒，產生5 106 2 107 個轉化的菌落。當質粒與這些大腸桿菌混合後，質粒粘附在大腸桿菌的表面，在...
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一般大腸桿菌感染者多是患有腸胃疾病者有之,且以慢性胃炎居多,也有十二指腸及腸炎等,多用胃三聯殺之,簡單配置為克拉黴素,阿莫西林,奧美拉唑或耐信,服用兩個療程可殺死比菌。大腸桿菌學名escherichia coli,就是一個種,但因為微生物容易變異,所以臨床上或科學研究中專 分離到的大腸桿菌有少許差屬...