1樓:匿名使用者
釀酒酵母的電轉感受態製備方法和電轉化方法
(1)接種工業酒精酵母至30 ml液體yepd培養
內基,30度培養12 h;
(2)取培養物以1%的接容種量轉接到30 ml新鮮yepd液體培養基中,30度培養8 h,
使菌體達到同步生長狀態;
(3)將酵母培養物置於冰上放置30 min後,6,000 r/min離心5 min收集菌體;
(4)棄上清,加入已預冷的15 ml超純水洗滌菌體一次;
(5)6,000 r/min離心5 min收集菌體,用15 ml 1 mol/l山梨醇重複洗滌菌體三次;
(6)離心收集菌體,加入200μl 1 mol/l山梨醇重懸浮菌體,取200μl的菌懸液至1.5 ml
離心管中;
(7)在製得的菌懸液中加入20μl(≤5μg)待轉化的質粒或dn**段,輕輕混勻後冰浴
10 min;
(8)將冰浴後的菌懸液轉入已預冷的電轉杯中,1,500 v電擊5 ms;
(9)加入適量體積的1 mol/l山梨醇將電轉後的菌懸液從電轉杯中洗出,取200μl塗布
相應的抗性平板;
(10)30度培養3-5天挑選轉化子。