1樓：筱莘
是根據蛋白質的理化性質將蛋白從組織或細胞中分離出來獲得純度較高的蛋白
提取就是將蛋白從組織裡採用一定的方法分離出來；一般植物組織或是動物組織中都有脂肪，核酸等物質，提取液中含有大量雜質，分離即是將蛋白與這些雜質分離開；純化是為了將分離過程中殘留的那部分雜質去除，進一步提高蛋白純度。
1、這個你有必要去了解下電泳的原理，事實上，膠體具有電泳現象，而蛋白能是一種生物大分子，能夠配成膠體溶液。電泳時，通過一定手段（加熱等）使蛋白質帶上電荷，那樣在電場中能夠定向移動。而蛋白質所帶電荷，蛋白質分子量的大小以及結構等會影響遷移的速率
2、雙向電泳分離技術利用複雜蛋白混合物中單個組分的電泳遷移，第一向通過電荷的不同分離，另一向通過質量的不同分離。
3、原理：用聚丙烯醯胺為支援基質的電泳程式。一般說來，實現聚丙烯醯胺凝膠電泳有兩種型別。
(1)單向電泳：採用完整的蛋白質或用十二烷基磺酸鈉(sds)處理的蛋白質的單向泳動，在有凝膠的平板上平行分離(過去也有用在玻管中的圓筒形棒狀凝膠進行電泳的，現已很少有人使用)。(2)雙向電泳：
首先用天然蛋白質進行分離，然後凝膠平板再用sds處理，樣品便在第二向得到分離。第一次分離了各種各樣的蛋白質，因此第二向分離的是蛋白質亞基
sds是一種陰離子去垢劑，可與蛋白質結合，形成sds-蛋白質複合物。?由於sds帶有大量負電荷，好比蛋白質穿上帶負電的「外衣」，蛋白質本身帶有的電荷則被掩蓋,即消除了蛋白質分子之間電荷差異。?因此在電泳時，蛋白質分子的遷移速度則主要取決於蛋白質分子大
2樓：匿名使用者
蛋白質樣品的製備主要包括分離和純化兩大步驟。前者是從生物體中提取出蛋白質，後者是提純某一種目標蛋白。
1 蛋白質帶有電荷，是兩性分子，因此能夠在電場中運動，因此能夠電泳。
2 雙向電泳中的第一向（等電聚焦）利用了蛋白質在不同ph值下帶有不同的電荷，從而可以在等電聚焦中停止在蛋白分子不帶電的ph值帶上。而第二項(sds-page)則是利用不同大小的蛋白質在page膠中泳動速率不同，即通過蛋白質分子量大小來區分。
3 聚丙烯凝膠電泳的基本原理是蛋白質在聚丙烯醯胺凝膠中，可因為自身大小緣故在凝膠的孔洞中運動，越大的蛋白受到的阻力越大，因此泳動越慢，從而分離蛋白。sds的作用是變性蛋白，並中和電性，使得蛋白質的泳動速率只決定於其分子量大小。
3樓：其實我是害蟲
一種分子放置在電場中，他就會以一定的速度移向適當的電極。所以呢，根據蛋白質分子的大小、構型、形狀、所帶淨電荷，就可以通過電泳將其混合物種不同組分給分離開來。page中因濃度不同會形成大小不等的孔隙，可以讓不同的分子在電場作用下穿過其中。
濃度不同，孔隙大小不同，能穿過的分子也不同，一定時間的電場作用下穿過的距離也不一樣。
sds是十二烷基硫酸鈉，其是常用的蛋白質的變性劑,可以中和電性，使蛋白質的泳動速率只取決於分子的大小~
sds-page樣品上樣前為什麼要加熱
4樓：北京索萊寶科技****
蛋白質電泳前,需用樣品緩衝液處理,樣品緩衝液中除sds外,還有還原劑β-巰基乙醇,它可將蛋白質分子中的s-s（二硫鍵）還原.電泳樣品製備時加熱,就是為了加速這些組分與蛋白質的反應.
5樓：匿名使用者
你好， 作用原理：聚丙烯醯胺凝膠為網狀結構，具有分子篩效應。它有兩種形式：
非變性內聚丙烯醯胺凝膠電泳（容native-page）及sds-聚丙烯醯胺凝膠（sds-page）；非變性聚丙烯醯胺凝膠，在電泳的過程中，蛋白質能夠保持完整狀態，並依據蛋白質的分子量大小、蛋白質的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開。
而sds-page僅根據蛋白質亞基分子量的不同就可以分開蛋白質。該技術最初由shapiro於2023年建立，他們發現在樣品介質和丙烯醯胺凝膠中加入離子去汙劑和強還原劑（sds即十二烷基硫酸鈉）後，蛋白質亞基的電泳遷移率主要取決於亞基分子量的大小（可以忽略電荷因素）。希望能幫到你。
pcr的原理是什麼
6樓：凱是凱喵的凱
pcr（聚合酶鏈式反應）技術的基本原理類似於dna的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。pcr由變性→退火→延伸三個基本反應步驟構成：
①模板dna的變性：模板dna經加熱至93℃左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備。
②模板dna與引物的退火（復性）：模板dna經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合。
③引物的延伸：dna模板--引物結合物在72℃、dna聚合酶（如taqdna聚合酶）的作用下，以dntp為反應原料，靶序列為模板，按鹼基互補配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈。
重複迴圈變性→退火→延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」，而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
7樓：demon陌
pcr原理：
dna的半保留複製是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈dna在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在dna聚合酶的參與下，根據鹼基互補配對原則複製成同樣的兩分子拷貝。
pcr技術的基本原理類似於dna的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：
①模板dna的變性：模板dna經加熱至93℃左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；
②模板dna與引物的退火（復性）：模板dna經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合；
③引物的延伸：dna模板--引物結合物在72℃、dna聚合酶（如taqdna聚合酶）的作用下，以dntp為反應原料，靶序列為模板，按鹼基互補配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈。
重複迴圈變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」，而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
8樓：次次次蛋黃米亞
pcr技術的基本原理：
該技術是在模板dna、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下，依靠於dna聚合酶的酶促合成反應。dna聚合酶以單鏈dna為模板，藉助一小段雙鏈dna來啟動合成，通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈dna模板中的一段互補序列結合，形成部分雙鏈。
在適宜的溫度和環境下，dna聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3´-oh末端，並以此為起始點，沿模板5´→3´方向延伸，合成一條新的dna互補鏈。
9樓：恏乄亖
pcr的原理：
該技術是在模板dna、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下，依賴於dna聚合酶的酶促合成反應。dna聚合酶以單鏈dna為模板，藉助一小段雙鏈dna來啟動合成，通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈dna模板中的一段互補序列結合，形成部分雙鏈。在適宜的溫度和環境下，dna聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3´-oh末端，並以此為起始點，沿模板5´→3´方向延伸，合成一條新的dna互補鏈。
拓展資料：
聚合酶鏈式反應是一種用於放大擴增特定的dn**段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊dna複製，pcr的最大特點，是能將微量的dna大幅增加。因此，無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸，還是幾十年前**案中**所遺留的毛髮、**或血液，只要能分離出一丁點的dna，就能用pcr加以放大，進行比對。這也是「微量證據」的威力之所在。
10樓：就是月醬
pcr(聚合酶鏈式反應)是利用dna在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫(經常是60°c左右)時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至dna聚合酶最適反應溫度(72°c左右)，dna聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基於聚合酶製造的pcr儀實際就是一個溫控裝置，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。
知識拓展：
聚合酶鏈式反應是一種用於放大擴增特定的dn**段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊dna複製，pcr的最大特點，是能將微量的dna大幅增加。因此，無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸，還是幾十年前**案中**所遺留的毛髮、**或血液，只要能分離出一丁點的dna，就能用pcr加以放大，進行比對。
這也是"微量證據"的威力之所在。由2023年美國mullis首先提出設想，2023年由其發明了聚合酶鏈反應，即簡易dna擴增法，意味著pcr技術的真正誕生。到如今2023年，pcr已發展到第三代技術。
1973 年，臺籍科學家錢嘉韻，發現了穩定的taq dna聚合酶，為pcr技術發展也做出了基礎性貢獻。
11樓：薄荷
聚合酶鏈式反應（英文：polymerase chain reaction，縮寫：pcr），是一種分子生物學技術，用於擴增特定的dn**段，這種方法可在生物體外進行，不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。
這種方法由凱利·穆利斯（kary mullis）於2023年開發，當時他是cetus公司的僱員，也是2023年諾貝爾化學獎的獲得者，它是一種簡單，廉價和可靠的方法複製dn**段，這個概念適用於現代生物學和相關科學的許多領域。 pcr可能是分子生物學中使用最廣泛的技術。這種技術被用於生物醫學研究，犯罪取證和分子考古學 。
拓展資料：
微生物複製是一個費時耗力的流程，首先要將dna經限制酶剪裁，再利用連線酶（ligase）加到載體（vector）中，之後利用瞬間電擊（electroporation）或是熱休克（heat shock）的方式，送到大腸桿菌感受態細胞（***petent cell）中，將此菌於培養皿大量繁殖培養，再經過繁複的分離、純化過程，時間通常需要近一週，才能大量複製片段。
所以僅需一小時的pcr能節省大量時間和繁複的操作，聚合酶鏈式反應技術被廣泛地運用在醫學和生物學的實驗室，例如用於判斷檢體中是否會表現某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因複製，以及親子鑑定。
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