如何防止蛋白質在分離純化過程中變性

2021-04-17 14:31:20 字數 1205 閱讀 5576

1樓:匿名使用者

防止蛋白質在分離純化過程中變性,主要還是控制溫度,ph,鹽濃度這幾個容易造成蛋白質變性的條件

溫度一般是儘量保持低溫

ph和鹽濃度都是針對不同的蛋白有不同的合適範圍

為防止蛋白質變性,在分離純化蛋白質的操作中應該注意什麼

2樓:匿名使用者

的幾項一般有:

1,低溫

溫度是造成蛋白質變性的主要原因之一,在較高的溫度下,絕大多數蛋白質較難保證結構的穩定。一般採取的操作是冰浴或者在層析冷櫃中進行實驗。

2,合適的ph

ph的劇烈變化,或者極高極低的環境ph值容易總成蛋白質變性。在分離純化時,因為不同層析柱的需求,可能會需要調節ph。使用較低濃度的鹽酸或者氫氧化鈉調節ph有助於保持蛋白的穩定性。

3,合適的鹽濃度

不同蛋白質的親疏水性不同,在不同的鹽濃度下有各自的穩定視窗,這個很難**,一般只能通過預實驗確定蛋白的穩定鹽濃度才能避免在分離純化時大量變性。

4,避免劇烈的攪拌或者晃動

因為剪下力對蛋白質的結構可能會造成破壞,所以在混勻蛋白溶液時需要儘可能的動作輕柔。而將蛋白溶液加入其它溶液時也需要貼壁傾倒,不要劇烈操作造成蛋白溶液起泡變性。

細胞培養上清中蛋白怎麼純化

從牛奶中分離出蛋白質的方法

3樓:匿名使用者

離心(nh4)2so4 鹽析

hic(hydrophobic interaction chromotography)

iex(ion exchange chromotography)(這兩個沒辦法翻譯)

個人認為電泳並不合適,一般電泳用於回蛋白質的鑑定,適用於極少量答的蛋白質,牛奶中蛋白質成分較複雜,得到的band會很多,這樣得到的蛋白質也沒辦法在收集起來。

4樓:匿名使用者

牛奶脫脂後即可進行層析,如果只是簡單的分析,使用葡聚糖凝膠柱就可以區分不同分子量大小的蛋白。在不同的峰處取樣進行sds-page.如果需要更詳細的分析,推薦高壓液相色譜。

5樓:匿名使用者

半透膜,用魚泡做成半透膜,可以達到你的要求,適合不具備離心條件的地方。武漢徐

6樓:匿名使用者

離心、鹽析、過層析柱,最後用sds-page電泳鑑定純度

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