1樓：北京索萊寶科技****
提染色體dna的基本原理：
基因工程實驗所需要的基因組dna 通常要求分子量儘可能大，以此增加外源基因獲得率，但要獲得大片段的dna 非易事，細菌基因組dna通常是個很大的環狀態dna，而在抽提過程中，不可避免的機械剪下力必將切斷dna，如果要抽提到大的dna 分子，就要儘可能地溫和操作，減少剪下力，減少切斷dna 分子的可能性；分子熱運動也會減少所抽提到的dna分子量，所以提取過程也要儘可能在低溫下進行。另外細胞內及抽提器皿中汙染的核酸酶也會降解制備過程中的dna，所以製備過程要抑制其核酸酶的活性。
另外製備的細菌染色體dna 必須是高純度的，以滿足基因工程中各種酶反應的需要，製備的樣品必須沒有蛋白汙染，沒有rna，各種離子濃度應符合要求，這些在染色體制備時都應考慮到。
大腸桿菌染色體dna 抽提首先收集對數生長期的細胞，然後用離子型表面活性劑十二烷基磺酸鈉（sds）破裂細胞，sds 具有的主要功能是：（1）溶解細胞膜上的脂類和蛋白質，因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜；（2）解聚細胞膜上的脂類和蛋白質，有助於消除染色體dna上的蛋白質；（3）sds 能與蛋白質結合成為r1—0—so3 r2 —蛋白質的複合物，使蛋白質變性而沉澱下來。但是sds 能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以後的提取過程中，必須把它除乾淨。
以免影響下一步rnase的作用。破細胞後rna經rnase消化除去，蛋白質經苯酚、氯仿:異戊醇抽提除去經灑精沉澱**dna。
枯草桿菌染色體制備與上類似，但略加修改的方法要適合教學要求。枯草桿菌是格蘭氏陽性菌，所以在sds 處理前需要使用溶菌酶裂解細胞壁。溶菌酶是一種糖苷水解酶，它能水解菌體細胞壁的主要學成份肽聚糖中的β—1，4 糖苷鍵，有助於細胞壁破裂，破裂的細胞壁在sds 的作用下溶菌，同時用蛋白酶k 消化蛋白質，能解離纏繞在染色體dna上的蛋白質，然後加入一定量的醋酸鉀，使蛋白質變性，通常離心除去，在這期間可加入核糖酸酶消化rna，最後用乙醇**dna。
提染色體dna的注意事項：
1、 重點防止dna的損傷，包括各種物理、化學和機械損傷。
2、 乾燥好的染色體dna最好溶於去離子水，以備後面直接利用。如果用te 緩衝液溶解，後面還需去離子。
3、 取上清時，如果上清液過少，可再加入少量水，重新離心，取上清，避免dna損失過多。
2樓：匿名使用者
dna與組蛋白構成核小體，核小體纏繞成中空的螺旋管狀結構，即染色絲，染色絲再與許多非組蛋白形成染色體。染色體存在於細胞核中，外有核膜及胞膜。從組織中提取dna必須先將組織分散成單個細胞，然後破碎胞膜及核膜，使染色體釋放出來，同時去除與dna結合的組蛋白及非組蛋白。
注意事項：
1.儘量簡化操作步驟，縮短提取過程，以減少各種有害因素對核酸的破壞。 減少化學物質對dna的降解，為避免過酸、過鹼對dna雙鏈中磷酸二酯鍵的破壞，操作多在ph值4.
0-10.0的條件下進行。
2.防止基因組dna的生物降解，主要是dnase降解基因組dna，dnase需二價金屬陽離子如mg2+等的啟用，可用edta等金屬離子螯和劑螯和mg2+以抑制dnase的活性。
3.減少物理因素對dna的降解，物理降解因素主要包括機械剪下力(如劇烈振盪、攪拌等)，細胞突然置於低滲液中導致的細胞**式破裂，dnase大量釋放，樣品反覆凍融和高溫等。
如果提取的質粒dna汙染有少量染色體dna,你們在操作過程中哪既不最可能出現問題
3樓：
.加入裂解液的時來候顛倒混勻的動自
作幅度bai太大，
會導du致基因組dna斷裂成小片段，和zhi質粒混dao在一起。
沉澱以後，吸取上清液的時候不小心吸入沉澱，會把夾在沉澱中的基因組dna也一起吸入矽膠吸附柱，這一步的可能性更大，通常都是這一步混入的基因組dna。.
4樓：共公的後代
把問題寫明白了再問效果最最佳。看到你的問題就一個字，暈！！！
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