1樓:匿名使用者
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一、為什麼要用同型對照?同 型對照是使用與一抗相同種屬**、相同亞型、相同劑量和相同的免疫球蛋白及亞型的免疫球蛋白,用於消除由於抗體非特異性與細胞結合而產生的背景染色。同型 對照是真正意思上的陰性對照,它不但可以用來設定流式細胞儀的電壓,而且還可以幫忙省去昂貴與繁瑣的重組細胞因子競爭封閉步驟。
在流式細胞儀上樣前,染色方式如下:樣本管:一抗+樣本,同型對照管:
同型對照+樣本
二、如何選擇同型對照?(1)一般選擇與一抗的成分完全相同種屬**、相同亞型和亞鏈、相同熒游標記的抗體,比如抗人的cd56 fitc標記的抗體,成份是mouseigg1,。那麼它的同型對照應該是fitc標記的mouseigg1,。
注意同型對照的成份跟它的名稱是相同的.(2)如果是抗體的組合形式是純化的一抗+熒游標記的二抗,那麼應該選擇一抗的同型對照。比如cd86的純化抗體,成分是mouseigg1,。
它的同型對照是純化的mouse igg1,。它的二抗pe標記的抗小鼠igg1,。那麼染色方式如下:
樣本管:純化的cd86+pe標記的抗mouse igg1(二抗)+樣本,同型對照管:純化的同型對照+pe標記的抗mouseigg1(二抗 )+樣本.
(3)如果沒有找到適合的同型對照,在保持**相同、熒游標記相同、免疫球蛋白類別相同條件下,那麼優先選擇的順序應該是亞鏈不同--亞型不同--相同類別。比如,某種的抗體的**是mouse igg2а,。如果在同型對照表裡面找到不到完全相同的同型對照,那麼優先選擇相同熒游標記mouse igg2а為同型對照。
如果也沒有找到mouse igg2а,那麼優先選擇相同熒游標記的mouse igg2b作為同型對照。如果最後還是沒有找到mouse igg2b,那麼選者相同熒游標記的mouse igg2作為同型對照。3、哪些客戶需要使用同型對照?
a 對流式不是非常熟悉的客戶。b 做胞內流式客戶,比如胞內細胞因子、趨化因子和訊號蛋白等。c 使用不常見的標誌或者特異性不高的標誌的客戶,因為客戶不熟悉不常見標誌的表達情況,根據同型對照可以判斷陽性細胞的位置。
一些特異性不高的抗體,如多抗,非特異性結合非常多,使用同型對照可排除假陽性。d 對流式非常熟悉又使用常用的表面標誌的客戶,一般可以不使用同型對照。4、為什麼有時候同型對照的表達會比抗體的表達高?
首先需要檢查同型對照的抗體是否加錯型別、劑量等。其次,因為有些標誌在細胞的表面或者胞內表達不高,而跟其類似的抗原非常多,那麼加入同型對照時,同型對照非特異性的結合會超過抗體的特異性,所以會造成這種現象。這個時候推薦使用其他陰性對照,如空白對照等。
2樓:勇懿佟欣然
同型對照是使用與一抗相同種屬**、相同亞型、相同劑量和相同的免
疫球蛋白及亞型的免疫球蛋白,用於消除由於抗體非特異性與細胞結合而產生的背景染色。同型
對照是真正意思上的陰性對照,它不但可以用來設定流式細胞儀的電壓,而且還可以幫忙省去昂貴與繁瑣的重組細胞因子競爭封閉步驟。
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