1樓：匿名使用者
一、原理
在正常細胞中，磷脂醯絲氨酸（ps）只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂醯絲氨酸（ps）由脂膜內側翻向外側。annexin v是一種分子量為35~36kd的ca2+依賴性磷脂結合蛋白，與磷脂醯絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂醯絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此annexin v被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。
將annexin v進行熒光素（egfp、fitc）標記，以標記了的annexin v作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發生。
碘化丙啶（propidium iodide, pi）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但對凋亡中晚期的細胞和死細胞，pi能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將annexin v與pi匹配使用，就可以將處於不同凋亡時期的細胞區分開來。
二、注意事項
1、必須活細胞檢測，不能用能破壞細胞膜完整性的固定劑和穿透劑固定或穿膜。
2、特殊細胞的染色方法：在消化或吹打時，有些細胞（如神經元細胞）很容易受到損傷，導致晚期凋亡或壞死比例非常高，不能反映真實結果。實驗的解決方法：
先低速離心，吸取細胞培養板中的液體，留少許液體，加入適量pi和annexin-v染色10min後，將漂浮細胞吸至離心管中，離心洗滌兩次，用pbs漂洗貼壁細胞兩次，加胰酶消化後將細胞懸液移至另一離心管中，離心洗滌，再與漂浮細胞合併後上流式細胞儀檢測。應用該法可降低晚期凋亡和壞死比例，增加早期凋亡細胞比例。
3、由於annexin-v為鈣離子依賴的磷脂結合蛋白，只有在鈣離子存在的情況下與ps的親和力才大，因而在消化細胞時，建議一般不採用含edta的消化液。
4、必須設定陰性對照和補償對照（分別單染）。
2樓：匿名使用者
最常用的是annexinv /pi雙染檢測凋亡，凋亡的細胞膜上的ps（磷脂醯絲氨酸蛋白）會從膜內轉移到膜外，我們利用annexinv抗體即可與之結合，有結和得說明這個細胞有凋亡，pi是用來區分死活細胞的，一般認為annexinv陽性，pi陰性的那群細胞即為早期凋亡細胞。
【求助】流式細胞儀檢測細胞凋亡結果該怎樣分析
3樓：憕
已經做完流
bai式，看到結果卻不知該怎du樣分析了zhi。我用的是annexinv-fitc 凋亡試劑盒 ，daoannexinv/pi雙染檢測細版胞凋亡。請教各位權，凋亡散點圖中第1，2，4象限到底分別代表什麼細胞？
手裡的資料說法都不相同。試劑盒說明書：1代表細胞收集過程中機械性損傷的細胞，2 代表繼發性壞死細胞，4代表凋亡細胞。
有資料說：1代表壞死細胞，2代表晚期凋亡細胞，4代表早期凋亡細胞。我就不明白了，既然是凋亡，就算是晚期，細胞膜也會破壞？
還有的認為，2象限代表晚期凋亡和繼發性壞死的細胞。
我用的是美國beckman-coulter公司試劑盒，它的說明說上就是這麼寫的：
quadrant 3：viable cellsquadrant 4：apoptotic cellsquadrant 2：secondary necrotic cells
這種說法在園子裡還沒見過。
應該以說明書為準嗎？我很迷茫。請您指點。
怎麼看annexin v-fitc細胞流式測凋亡**
4樓：謝志強啊啊
在二維散點圖上，pi 和 annexin v 分別是x和y軸。一般認為pi單染
的細胞是已經死亡的細胞，annexin v 單染的細胞是凋亡早期的細胞，而雙染是凋亡中期的。
需要在散點圖上先畫出4個象限，位置根據無染色的陰性細胞先定出左下象限。
annexin v是一種檢測細胞凋亡的試劑，在正常細胞中，磷脂醯絲氨酸只分布在細胞膜脂質雙層的內側，細胞發生凋亡早期，膜磷脂醯絲氨酸（ps）由脂膜內側翻向外側。
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