1樓：匿名使用者
annexin v-egfp細胞凋亡檢測試劑盒
產品說明：
凋亡是一種程式性的細胞死亡，與細胞的壞死有生化和形態等方面的不同。磷酯醯 絲氨酸(phosphatidylserine, ps)是細胞膜的一種組成成分，在正常細胞主要分佈在細胞膜內側；細胞發生凋亡的早期，ps會外翻到細胞表面，即細胞膜外側。annexin v 對ps有高度的親和力，可以選擇性結合和標記ps 。
本試劑盒採用重組人annexin v-egfp融合蛋白，來檢測細胞凋亡時出現在細胞膜表面的ps，標識出凋亡細胞。由於壞死細胞和凋亡晚期細胞，其膜內側的ps也可以被annexin v結合，通常用另一種活細胞非透過性熒光染料碘化丙啶(propidium iodide, pi)進行雙重染色，以區別凋亡早期細胞與壞死細胞和凋亡晚期的細胞。用annexin v-egfp和pi染色後，正常的活細胞不被annexin v-egfp和pi著色；凋亡早期的細胞僅被annexin v-egfp著色，pi 染色呈陰性；壞死細胞和凋亡晚期的細胞可以同時被annexin v-egfp和pi著色。
用流式細胞儀或熒光顯微鏡直接觀察ps外翻這一細胞凋亡的重要特徵，是一種快速簡便的細胞凋亡經典檢方法。
操作方法：
染色液的配製：
1) 取適量4x annexin v結合液，用雙蒸水稀釋至1xannexin v結合液。後續工作均使用1x annexin v結合液。
2) 將20 μl annexin v-egfp加入1 ml annexin v結合緩衝液中，即配成10次測試的 annexin v染色液。
3) 將5 μl pi加入5 ml annexin v結合緩衝液中，即配成10次測試的pi染色液。
熒光顯微照相操作方法：
1) 培養細胞用所需方法處理以誘導凋亡。應同時設定陰性對照。
2) 對貼壁生長細胞，離心收取培養液內的懸浮細胞，並用胰酶消化貼壁細胞，合併兩部分細胞懸液；對懸浮生長細胞，直接收集細胞。用冰冷pbs洗滌細胞後， 1000g離心5 min，棄上清，加入100 μl annexin v染色液輕輕重懸細胞。室溫(20-25℃)放置，孵育10~15 min。
再加入pi染色液0.5 ml混勻。室溫孵育5 min
3) 完成孵育後，1000g離心5 min，棄上清，輕輕重懸細胞於50~100μl annexin v結合緩衝液中；取25-50μl細胞懸液滴到一張顯微載玻片上，再蓋上一張蓋玻片。
4) 熒光顯微鏡下，用藍光激發，觀察和拍攝細胞紅色發射影象。結合annexin v-egfp 的凋亡細胞的質膜將顯示綠色光圈；膜結構不完整的壞死細胞和晚期凋亡細胞在整個核區被pi染成紅色而質膜為annexin v-egfp陽性呈現為綠色光圈。
5) 培養於48孔板或96孔板內的貼壁細胞，也可進行原位染色。在凋亡誘導結束後，用冰冷pbs輕輕洗滌細胞，完全去除pbs，加入100 μl annexin v染色液，室溫孵育 10~15 min；吸除染色液，加入pi染色液0.5 ml混勻。
室溫孵育5 min。立即在倒置熒光顯微鏡下觀察。
流式細胞分析操作方法：
1) 培養細胞用所需方法處理以誘導凋亡。應同時設定陰性對照。
2) 對貼壁生長細胞，用胰酶消化製備成單細胞懸液；對懸浮生長細胞，直接收集細胞。用冰冷pbs洗滌細胞後，取5~10萬重懸的細胞，1000g離心5 min，棄上清，加入100 μl annexin v染色液輕輕重懸細胞。室溫(20-25℃)放置，孵育10~15 min。
3) 再加入pi染色液0.5 ml混勻。室溫孵育5 min。
4) 完成孵育後，立即進行流式細胞分析。採用488 nm雙波長激發，測定~510 nm和》575 nm的發射，細胞應可分成三個亞群：活細胞僅有很低的熒光強度，凋亡細胞有較強的綠色熒光，壞死細胞（包括極晚期凋亡細胞）有綠色和紅色熒光雙重染色。
注意事項：
1) 該試劑盒只能檢測活細胞，而不能用於切片、擦刮、固定或浸潤細胞樣品的檢 測。如需對活細胞固定進行其它檢測，可在本試劑盒標記完成後，用annexin v結合緩衝液清洗細胞，再固定進行後續操作。
2) 細胞凋亡是一種持續變化的動態過程，選擇合適的誘導時間對觀察凋亡比較重要。
3) annexin v和pi染色的活細胞應儘快檢測。
4) 微生物汙染的細胞樣品或試劑可導致錯誤的觀察結果。
2樓：
有物理方法，化學方法，生物學方法
物理方法基本上是流式細胞儀之類的儀器
化學方法基本上就是染色了觀察
生物學方法就是用熒光免疫之類的
幾句話也說不清楚
感興趣的話可以看翟中和的《細胞生物學》，細胞衰老和死亡這一章
細胞凋亡的早期檢測方法有哪些
3樓：
細胞凋亡的檢測方法有很多，下面介紹 7 種常用的測定方法：形態學檢測法，磷脂醯絲氨酸外翻分析（annexin-v）法態學，光探針雙標記法，dna ladder 法，annexin v/pi 雙染色法，tunel 法，caspase-3 活性檢測法。其中annexin v/pi 雙染色法，tunel 法使用的是較多的，biodai是使用這方面的盒子，會更方便些，在熒光訊號上還是挺強烈的，沒有細胞毒性，也不易淬火。
細胞凋亡最常用的方法檢測方法有哪些？ 5
4樓：
一、形態學觀察方法
二、dna凝膠電泳
三、酶聯免疫吸附法
四、流式細胞儀定量分析
檢測細胞凋亡的三種常用方法，您知道幾種
5樓：依白
一、形態學觀察方法
二、dna凝膠電泳
三、酶聯免疫吸附法
四、流式細胞儀定量分析
細胞凋亡的形態學檢測方法有哪些
6樓：根據
形態學觀察方法:
1、he染色、光鏡觀察：凋亡細胞呈圓形,胞核深染,胞質濃縮,染色質成團內塊狀,細胞容表面有「出芽」現象.
2、丫啶橙（ao）染色,熒光顯微鏡觀察：活細胞核呈黃綠色熒光,胞質呈紅色熒光.凋亡細胞核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內側,可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體.
3、臺盼藍染色：如果細胞膜不完整、破裂,臺盼藍染料進入細胞,細胞變藍,即為壞死.如果細胞膜完整,細胞不為臺盼藍染色,則為正常細胞或凋亡細胞.
此方法對反映細胞膜的完整性,區別壞死細胞有一定的幫助.
4、透射電鏡觀察：可見凋亡細胞表面微絨毛消失,核染色質固縮、邊集,常呈新月形,核膜皺褶,胞質緊實,細胞器集中,胞膜起泡或出「芽」及凋亡小體和凋亡小體被臨近巨噬細胞吞噬現象。
請問流式細胞儀檢測細胞凋亡的原理是什麼
一 原理 在正常細胞中，磷脂醯絲氨酸 ps 只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂醯絲氨酸 ps 由脂膜內側翻向外側。annexin v是一種分子量為35 36kd的ca2 依賴性磷脂結合蛋白，與磷脂醯絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂醯絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜...
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