1樓：匿名使用者
1.挑取bai少許農桿菌lba4404，接種於du5ml lb液體培養基 (含50mg/l str)中，28℃、zhi200r/mim培養dao過夜。
內2.取2ml培養物於
容lb液體培養基 (含50mg/l str) 中繼續培養，直至od800 為0.5左右。
3.將培養物置冰浴中30min，4℃、5000r/min、離心5min，棄去上清液。
4.用10ml冷的0.1mol/l nacl懸浮菌液。
5.4℃、5000r/min，離心5min，棄去上清液。
6.用1ml冷的cacl2 (20mmol/l)懸浮，分裝成50μl/管，液氮中冷凍後至-80℃儲存。
生物幫上面有這方面的介紹， http://www.bio1000.
com/zt/protein/225128.html 限制性內切酶,限制性酶切位點,限制酶,dna聚合酶,rna聚合酶,連線酶,修飾酶,核糖核酸酶,dna連線酶作用,限制性內切酶作用,限制性內切酶原理。
凍融法制備農桿菌感受態細胞，並且轉化質粒相關問題。
2樓：佰草集
實驗結果
不能肯定來的說明結果是成功源
的，做bai實驗的陰性對照也很du重要，陰性zhi對照必須做出陰性結果。如樓dao下的網友所說，可能是你的感受態菌被質粒汙染了。現在我回答一下你的 追問吧：
「未轉化質粒的感受態細胞在同樣的lb上塗板也長出單菌落」，那麼這個長出的單菌落你有沒有做菌落pcr的鑑定？如果你沒有做菌落pcr的鑑定，還有一種可能就是你的板子上的抗生素濃度不夠，導致長出了菌，這個菌到底含不含有你的目的質粒，要做pcr鑑定，不要光看菌落長出與否。建議你把板子的抗生素濃度提高，同時看看未轉化質粒的感受態細胞在同樣的lb上塗板也長出的單菌落的pcr鑑定結果，從而判斷是否僅僅是感受態被質粒汙染了
3樓：匿名使用者
感受態可能被其它帶有這種抗生素抗性的質粒汙染了，制感受態的時候注意挑取單菌落，建議你重製，不然下游反應或是測序可能受影響
4樓：匿名使用者
不一定 建議重新做一下
農桿菌的感受態細胞裡帶有ti質粒嗎
5樓：匿名使用者
農桿菌之所以被用於轉基因工程，就是其含有ti質粒，ti質粒上的t-dna上有8個左右的回
基因在植物細答胞內表達，農桿菌通過侵染植物傷口進入細胞後，可將t-dna插入到植物基因組中。因此，可以通過將目的基因插入到經過改造的t-dna區，藉助農桿菌的感染實現外源基因向植物細胞的轉移和整合，然後通過細胞和組織培養技術，得到轉基因植物。
農桿菌感受態細胞製備失敗和質粒沒有轉進去的可能原因
6樓：匿名使用者
1.你到底是 感受態沒製備好呢？還是轉化了，但平板上沒克隆呢？
2.你轉一個有人轉成功過的試試，排除感受態和你自己操作是不是有問題？
3.你用的是 哪種菌啊？lba4404？gv3101? 3抗有沒有+錯啊？
4.你是電擊？熱擊？
轉化實驗中除了用大腸桿菌的感受態細胞還可以用哪種菌的感受態細胞?
有沒有人這樣培養過農桿菌？ 做植物轉化的。。
7樓：xxd糰子
你這個方法，是為了做農桿菌的感受態，後期轉化備用？
這個方法我沒有接觸過。
傳統的農內桿菌感受態製法和大腸桿菌感受態製法類似，轉化效率挺高的，實驗室一直用的這個方法。
如果你這個是培養農桿菌，為什麼要用硫酸鎂活化而不是yeb液體培養基？這容個可以培養農桿菌？同問，求解釋
一般來說，農桿菌轉化也和大腸桿菌類似，
製備農桿菌感受態，然後將重組體轉化至農桿菌感受態細胞中，最後用這個轉化後的農桿菌去侵染你的植物。
感受態細胞的製備以及感受態細胞的作用，特徵？ 5
8樓：匿名使用者
微生物細胞用鈣離子處理
感受態細胞的細胞膜通透性變大
在基因工程的匯入過程中可作為受體細胞。
takara感受態製備試劑盒可以製備農桿菌感受態嗎
9樓：電
20mm應該來20mm吧
配置20mm氯化鈣
首先要源看氯化鈣水氯化鈣氯化鈣水合物根據其量進行計算假設cacl2.nh2o量n則配置 1l 20mm cacl2需要加 n*20/1000 g cacl2.nh2o
類推這種提問感覺沒有意義
這個可以自己找下資料
大腸桿菌感受態和農桿菌感受態的選擇
除非你的實驗目的一定要求你要用農桿菌，或者是最後一步要轉基因了，否則，大腸桿菌更好，因為它的商業化各種都很齊全，想要什麼就有什麼。大腸桿菌dh5a感受態細胞與大腸桿菌bl21感受態細胞有什麼區別 首先，這兩種菌的基因型不一樣，這就導致了這兩種菌有不同的用途 dh5a是用於克隆的，構建質粒，建庫，保藏...
農桿菌感受態製備為什麼要加NaCl
應該是保持內的滲透壓,保持細胞的正常形態,因為na和cl是細胞物質運輸的重要離子 應該是加cacl2吧 為的是增加農桿菌細胞壁的通透性 農桿菌感受態的製備為什麼要冰浴 樓上別扯了,那是為了讓細胞膜流動性降低,利於dna的結合,同時使細胞暫停生長,維持在對數生長期的高活性 使它的細胞壁變薄,易於質粒的...
同科生物感受態細胞製備速凍後可以存放負20度嗎
如果不具備條件，負20度短時間儲存也可以，但是時間長了細胞內部液化度較高的情況下，細胞會由於流動性的原因造成不可逆損傷。所以長時間儲存的話建議要放於負80攝氏度或者液氮中儲存。感受態細胞製備完成速凍後存放負20可以嗎 感受態細胞製備完成速凍後一般是負 80度或者液氮中凍存 如果不具備條件，負20度短...