1樓：匿名使用者
轉染後western檢測不到高表bai
達量的目的du蛋白有很多原因zhi
首先就是抗體是否合適需dao檢測的目的蛋白，內可以考慮容更換其他抗體然後轉染可以是瞬時轉染，也可以是穩定細胞株轉染假如是瞬時轉染檢測不到，可能就是抗體或者western操作的問題假如是穩定細胞株轉染檢測不到，可能是目的基因沒有穩定整合到基因組中，或者插入的位置不對，需要重新篩選細胞株
2樓：符津章昌茂
搜一下：轉染後western檢測不到高表達量的目的蛋白怎麼辦
轉染後western不出結果可能會有什麼原因?
3樓：儒雅的久寵不膩
轉染後western檢測不到高表bai達量的du
目的蛋白有很多原因zhi 首先就是抗體是否合適需檢dao測的目的蛋白回，可以考慮更換其他抗答體 然後轉染可以是瞬時轉染，也可以是穩定細胞株轉染 假如是瞬時轉染檢測不到，可能就是抗體或者western操作的問題 假如是穩定細。
構建標籤蛋白，因為沒有內源性抗體，所以就用標籤wb檢測，怎麼都檢測不到目的蛋白（跨膜蛋白）
4樓：手機使用者
方法一：western blot and strip通過wb檢測所有發生泛素化的蛋白條帶，拍照後，將膜strip。然後與特定蛋白的抗體和特定泛素化位點的抗體反應，顯色拍照406通過陽性條帶的對比來初步判斷某一特定蛋白的特定位點發生了泛素化方法二：
western blot and immunoprecipitations 通過免疫共沉澱方法將某一特定蛋白以及與其結合的蛋白分離出來。分離出來的蛋白再進行sds電泳和western blot分析。這一方法可以明確具體哪個蛋白的哪個賴氨酸殘基發生了泛素化修飾。
方法三：in vitro ubiquitination assay將要研究的目的基因轉染293細胞waei使其大量表達。24h後提取並分離目的蛋白。
在體外反應buffer中將我們要研究的蛋白a（被泛素化的那個蛋白）與ube1ubeh13－uev 1 a heterodimer complex waha－ubiquitin以及我們要研究的蛋白b（引起蛋白a泛素化的蛋白）62共同進行孵育。將孵育後的產物進行ip和wb分析。這一方法可以明確引起哪個蛋白是引起某蛋白髮生泛素化修飾的e3連線酶。
方法四：in vitro ubiquitin－binding assay將我們要研究的蛋白（被泛素化的蛋白）基因轉染293細胞大量表達後提純。或者直接提取內源性蛋白。
在體外與k63－ or k48－linked ubiquitin chain petides孵育，然後通過sds電泳並用泛素化抗體進行檢測。這一方法可以明確要研究的蛋白哪個賴氨酸殘基容易發生泛素化。
我用flag單抗做western blot， 檢測不到含flag標籤的目的蛋白，你覺得是為什麼呢？
5樓：匿名使用者
這個flag標籤抗體能檢測到其他帶flag標籤的蛋白嗎？
例如空載對照。如果空載也不行，那基本抗體就歇了。
如果有，就要看flag標籤是不是正確表達了，如果表達不正確也會影響到檢測的。
為什麼我構建的真核表達載體高表達mrna卻檢測不到目的蛋白
6樓：匿名使用者
有的時候在不同的copy表達體系裡bai
面對蛋白的表達量是du有影響的。
zhi當構建完成後攜帶有信
dao號肽的時候，一些蛋白在真核表達體系中表達量極低。去除訊號肽序列值後，直接表達成熟肽，表達水平明顯提高。
所以說構建的真核表達載體高表達mrna卻檢測不到目的蛋白是完全有可能的。
7樓：
三人行，必有我師焉。擇其善者而從之，其不善者而改之。
一個質粒轉染後為什麼表達兩條蛋白帶
8樓：匿名使用者
轉染(transfection)：指真核細胞由於外源dna摻入而獲得新的遺傳標誌的過程.常規轉染技術可分為瞬時轉染和穩定轉染（永久轉染）兩大類.
轉染目的：研究你的目的片段到細胞內的表達.
轉染一般是將目的基因構建到某個載體,將構建好的重組質粒匯入細胞中,這樣就能表達你所要的目的蛋白用於後續實驗.
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