1樓：匿名使用者
做蛋白在真核細胞的表達，但是表達量很低，怎麼解決實際上真核生物的蛋白也可以用
內真核細胞容蛋白表達系統來實現，而且效果往往更好。
用原核生物來表達主要還是因為操作簡單，快速。如果希望表達和純化的蛋白性質穩定，經原核系統表達之後仍然有正確的摺疊構象，那麼使用原核表達系統就很合適了。
有的時候在不同的表達體系裡面對蛋白的表達量是有影響的。
當構建完成後攜帶有訊號肽的時候，一些蛋白在真核表達體系中表達量極低。去除訊號肽序列值後，直接表達成熟肽，表達水平明顯提高。
所以說構建的真核表達載體高表達mrna卻檢測不到目的蛋白是完全有可能的。
我做了表達實驗，但卻沒有目標蛋白的表達，為什麼
2樓：東邊更美
做蛋bai白在真核細胞的表達du，但是表達量很低，怎麼zhi解決實際上dao真核生物的蛋白專
也可以用真核細屬胞蛋白表達系統來實現，而且效果往往更好。
用原核生物來表達主要還是因為操作簡單，快速。如果希望表達和純化的蛋白性質穩定，經原核系統表達之後仍然有正確的摺疊構象，那麼使用原核表達系統就很合適了。
有的時候在不同的表達體系裡面對蛋白的表達量是有影響的。
當構建完成後攜帶有訊號肽的時候，一些蛋白在真核表達體系中表達量極低。去除訊號肽序列值後，直接表達成熟肽，表達水平明顯提高。
所以說構建的真核表達載體高表達mrna卻檢測不到目的蛋白是完全有可能的。
細胞中某個基因的rna表達水平很低，而蛋白表達正常，這是什麼原因
3樓：fly小小維尼熊
佳學基因專業與基因檢測和基因解碼。
原核生物中表達真核蛋白應該注意什麼問題
4樓：匿名使用者
因為原核生物缺乏復翻譯後的制修飾，所以表達的真核蛋白和真核中表達有所差異，可能沒有生物學活性等，但是要是做免疫原應該沒問題；
基因需為cdna，不能含有內含子，原核細胞不能對mrna進行剪下；
要分析dna序列資訊，分析其密碼子，由於原核與真核生物的密碼子偏好性不同，所以有時可能會出現稀有密碼子而影響表達的情況；
要注意你要表達蛋白的大小問題，一般情況下大於70kd的蛋白在原核菌種不容易表達或表大量低；
原核表達出來的一般是包涵體，所以蛋白的復性很關鍵，否則表達出來了也不能用，沒有活性。
原核表達載體和真核表達載體的區別
5樓：威海博銳化機
一、表達載體不同：
原核表達載體構建重組表達載體：
1、載體酶切：將表達質粒用限制性內切酶（同引物的酶切位點）進行雙酶切，酶切產物行瓊脂糖電泳後，用膠**kit或凍融法**載體大片段。
2、pcr產物雙酶切後**，在t4dna連線酶作用下連線入載體。
真核細胞表達載體之一為pegfp-n1載體，具有對方面的優點。pegfp-n1載體上攜帶有egfp蛋白表達基因。
二、表達實現方式不同：
真核表達載體具有neo基因，可以採用g418來篩選已成功轉染了該載體的靶細胞。這些特殊的結構可以實現目的基因在靶細胞內的穩定表達。
三、獲得目的基因方式不同：
pegfp-n1載體從結構上看，質粒具有很強的複製能力，可以滿足隨宿主細胞**時跟隨胞質遺傳給新生的子細胞，這是真核細胞表達載體保證目的基因穩定表達的因素之一。
原核表達載體獲得目的基因：
1、通過pcr方法：以含目的基因的克隆質粒為模板，按基因序列設計一對引物（在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點），pcr迴圈獲得所需基因片段。
2、通過rt-pcr方法：提取總rna，以mrna為模板，逆轉錄形成cdna第一鏈，以逆轉錄產物為模板進行pcr迴圈獲得產物。
6樓：匿名使用者
原核載體可以將真核基因表達，但是表達出來的蛋白是沒有活性的，因為缺少翻譯後修飾系統。。。真核的表達載體呢 由於比較大 不適合大量快速擴增，所以要在其載體上構建可以在原核生物 如大腸桿菌中複製的所需的複製原件 。。。。綜上 在應用的時候 要構建 穿梭質粒 可以穿梭於 原核和 真核 呵呵 還有就是 原核表達載體的基本元件和真核的有不同的地方 。。。。。
總覺得不夠正確答案 。。。。。有些人緣的蛋白在原核裡沒有蛋白翻譯後修飾，表達後沒有活性，這時候就得在真核裡表......
7樓：匿名使用者
主要是因為原核和真核表達系統所需的表達元件不同。
比如說啟動子，終止子在兩種表達系統中是不一樣的。
帶有真核表達元件的是真核載體，能在真核生物內表達；
帶有原核表達元件的是原核載體，能在原核生物內表達。
兩者都具有的為穿梭載體。
1)真核表達載體和原核表達載體就是能在真核生物或原核生物中表達的載體,它們一般都帶有能在真核生物或原核生物中表達的必需表達元件;
2)真核表達和原核表達的目的都是為了能夠大量獲得自己所需要的目的基因的表達產物,最好有生物活性,以便下一步的實驗需要.
3)原核表達載體一般只能在原核生物中表達外源基因,但有些穿梭載體可以分別在真核和原核生物中表達它們的表達元件.
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