1樓：匿名使用者
如何選擇 一抗 二抗！ 你真是問對人了！我現在就告訴你如何選擇實驗需要的抗體！最優回答注意看哦！
1. 一抗選擇
（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、別名、亞型等資訊。
（2）確定您的實驗型別，elisa，wb，ihc，icc，或者是facs。biorbyt的每種抗體說明書都會列出抗體經驗證過適用的實驗型別，如果抗體說明書沒有提及的應用型別，並不意味著該抗體不適用於此種分析應用型別，而僅是說明尚未經過此種實驗驗證。
（3）確定實驗樣本的種屬，human，mouse，rat等。我們的抗體說明書都列出該抗體驗證過的適用物種，可根據說明書列出已驗證的種屬來選擇適合你實驗需要的抗體。
（4）樣本抗原蛋白的結構性質。瞭解樣本抗原蛋白的結構性質有助於選擇最合適的抗體，待測樣本蛋白的結構域和樣本在提取和處理過程中是否會變性，蛋白空間構象的改變，會影響抗體的免疫親和反應。
（5）單多克隆抗體的選擇。一般單克隆抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現非特異性染色（可以通過封閉等避免）。
2. 二抗選擇
（1）種屬**。主要根據一抗種屬**而決定二抗**，如一抗是小鼠**，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。
（2）標記物的選擇。有hrp、biotin、熒光素等標記物。免疫組化，wb二抗主要選擇hrp，biotin標記的二抗，而免疫熒光染色可按實驗需要選擇不同熒光素標記的二抗，如fitc、cy3、pe等。
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做免疫熒光抗體選擇問題。
2樓：匿名使用者
這個貌似挺困難的。。。
自己做一抗
或者別家公司去看看
或者給病毒組分帶上不同熒游標記，就是重組病毒了。。。
你要用什麼儀器觀察病毒呢？
是直接看病毒，還是看病毒組分在細胞、動物、植物中的定位？
核定位的蛋白做免疫熒光需要dapi染色麼
3樓：義翹神州加油
需要，輔助確定細胞核位置。義翹典型結果如下，可以作為參考。
4樓：路戍人
1．實驗原理
免疫染色的實驗原理類似於western blotting，兩者都是運用抗體的特異性識別作用來顯示目的蛋白，但是由於免疫染色需要在原位進行，而且蛋白沒有經過富集，因此其實驗難度較高。
實驗的基本原理是：利用固定劑（通常是甲醛或多聚甲醛）將細胞固定，使得細胞膜的通透性大大增加，並且利用triton-x-100使得一部分膜蛋白變性，從而使通透性進一步加強。利用正常羊血清封閉，可以令許多蛋白先與血清內的非特異性抗體結合，而特異性的抗體由於動力學的關係可以通過競爭性的反應與目的蛋白結合，這一過程可以保證抗體識別的特異性。
二抗可以特異性識別一抗的fc區域，利用二抗連線不同的熒光基團，就可以在熒光顯微鏡下觀察到不同的熒光，從而顯示目的基因的表達情況。
另外，免疫熒光實驗由於其較高的敏感性可以顯示出基因表達的亞細胞情況(核內，核外，膜上以及一些較大的細胞器上)，所以通常被用來作為基因定位的方法。
dapi的中文名稱是4，6-聯脒-2-苯基吲哚，是一種常用的熒光染料，其作用機理與溴化乙錠（eb）等染色劑的機理類似：它們與dna雙螺旋的凹槽部分可以發生相互作用，從而與dna的雙鏈緊密結合。結合後產生的熒光基團的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好uv（紫外光）的激發波長是356nm，使得dapi成為了一種常用的熒光檢測訊號。
jagielski m. et. al在2023年首次運用該技術檢測細胞培養中的支原體感染。
後來隨著技術的進步，該技術被運用於各種微生物的檢測、生長監測，胚胎髮育過程的檢測，細胞週期的檢測和各種核定位的實驗。
做免疫熒光怎麼看蛋白是在細胞核表達還是胞漿表達
5樓：南京金益柏生物科技****
復染細胞核，常規用過的是dapi進行細胞核覆染（藍色）。目的是為了鑑別目的蛋白的位置是胞核表達，還是胞質表達或胞膜表達。
一般來講，如果是胞核表達，會和藍色的細胞核顏色重疊；胞質或胞膜表達則不會重合，單獨看目的蛋白的表達，會看到有個黑色的空洞的，尤其細胞影象更為明顯。
從樓主的**看，貌似是在胞核表達（因為紅色和綠色都很弱，在胞質沒有看到，相反卻和胞核重合了）
染色質量需要進一步提高。
6樓：匿名使用者
免疫組化和免疫熒光都是蛋白定位的檢測（也就是確定蛋白是表達在細胞核/漿/膜）。
免疫組織化學又稱免疫細胞化學，是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來，藉助顯微鏡的現像和放大作用，在細胞，亞細胞水平檢測各種抗原物質，並可在原位顯示相應的基因和基因表達產物。免疫組織化學技術現已有：
免疫熒光組織（細胞）化學技術、免疫酶組織（細胞）化學技術、親和組織化學技術、免疫金銀及鐵標記免疫組織化學技術等。免疫熒光組織（細胞）化學技術是採用熒光素標記的已知抗體（或抗原）作為探針，檢測待測組織、細胞標本中的靶抗原（或抗體），形成的抗原抗體複合物上帶有熒光素，在熒光顯微鏡下，由於受高壓汞燈光源的紫外光照射，熒光素髮出明亮的熒光，這樣就可以分辨出抗原（或抗體）的所在位置及其性質，並可利用熒光定量技術計算抗原的含量。以達到對抗原物質定位、定性、定量測定的目的。
共定位(免疫熒光)是什麼？
7樓：糟油酒丸
免疫熒光可以用於共定位，但也可以用於很多其他應用。共定位不能夠說是免疫熒光的主要用途。
一樓回答有助於理解共定位，但是「加上紅色/綠色熒光蛋白的標籤」這種說法並不是免疫熒光的做法。在免疫熒光中，與目標蛋白相結合的是帶有熒光分子基團的抗體，此種抗體雖然發熒光，但不稱為熒光蛋白。
另外，共定位不能夠用於證明相互作用，更不可能證明蛋白之間的共價結合。
共定位就如字面意思上所說的，只能夠表明蛋白a和b都在此細胞有表達，並且在同樣的細胞內位置/細胞器。
就好像你用gps看到，有兩個人a和b此時都在某市同一家咖啡廳內，並不能夠證明他們在幽會。但是如果說因為同時在一處這個事實而懷疑有姦情，也並不全是毫無道理，只是需要別的手段來證明罷了。
8樓：匿名使用者
共定位是說明兩個蛋白存在直接或間接相互作用的細胞學佐證（只是佐證，不是直接證據）。
如果蛋白a本身是定位於細胞內的x細胞器，而與蛋白b同時表達的時候蛋白a跟蛋白b一起定位到了y細胞器，那麼說明蛋白a和蛋白b是共定位的，也就是這兩個蛋白可能存在相互作用（只是可能）。
請選擇上面的推薦答案，是對的，回答的時候有些大意，沒看到「免疫」二字，這裡糾正一下之前的回答~~~
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