1樓:南京金益柏生物科技****
二者有區別的,如果既要做免疫熒游標記又要做流式細胞術,在購買二抗時需先了解產品是否有兼有這兩種用途;也有但用於免疫熒光或但用於流式的二抗。
請教免疫熒光雙標中熒光二抗的選擇是否合適
2樓:南京金益柏生物科技****
一般來說,選擇合適的二抗需要從下面幾個方面考慮:
1.二抗應選用與使用的一抗相同的物種**;
2.二抗需與一抗的類別或亞類相匹配.這通常是針對單克隆抗體而言.多克隆抗體主要是igg類免疫球蛋白,因此相應的二抗就是抗igg抗體;
3.一般來說,不同的種屬**與二抗的質量沒有必然的聯絡,**于山羊的二抗與**於驢的二抗在一般的實驗裡沒有太多的差別.然而在一些特殊的實驗裡, 如雙標實驗裡,如果其中一個一抗是山羊**的,一個是小鼠**的,則相應的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗,這時候,二抗就不能選擇山羊或者小鼠**的.
3樓:闞爽姓彥
免疫熒光法雙標法我自己到沒做過,不過我一同學在威斯騰生物做過免疫熒光雙標
免疫熒光染色的一抗,二抗分別用什麼稀釋? 5
免疫熒游標記為什麼不直接標記一抗而標記二抗?
4樓:e拍
因為一種一抗只識別一種底物,如果每種一抗都需要熒游標記,那這樣成本很高。而二抗既可以和一抗結合,又帶有可以被檢測出的標記(如帶熒光、放射性、化學發光或顯色基團),作用是檢測一抗,提高了通用性。
一抗是針對抗原的抗體,二抗是針對一抗的抗體,即抗體也可以充當抗原刺激機體產生抗體。一抗二抗都是一種可以特異結合別的物質的基團,而且一抗可以至少結合兩種其他基團(底物和二抗)。
擴充套件資料
免疫熒光技術是標記免疫技術中發展最早的一種.它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。coons等於2023年首次採用熒光素進行標記抗體獲得成功。經過幾十年的發展,該技術已相當成熟。
主要特點是:特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是:非特異性染色問題尚未完全解決,結果判定的客觀性不足,技術程式也還比較複雜。
熒光免疫法按反應體系及定量方法不同,還可進一步分做若干種。與放射免疫法相比,熒光免疫法無放射性汙染,並且大多操作簡便,便於推廣。國外生產的tdm用試劑盒,有相當一部分即屬於此類,並且還有專供tdm熒光偏振免疫分析用的自動分析儀生產。
由於一般熒光測定中的本底較高等問題,熒光免疫技術用於定量測定有一定困難。新發展了幾種特殊的熒光免疫測定,與酶免疫測定和放射免疫分析一樣,在臨床檢驗中應用。
5樓:匿名使用者
熒光基團可以直接標記一抗,許多抗體公司都有熒游標記的一抗**。但是這樣成本高,一抗有成千上萬種,如果每種一抗都需要熒游標記,那使用起來非常不方便。所以通行的做法是標記二抗,而二抗的抗原則是一抗的igg,比如二抗可以標記兔抗鼠igg,那麼所有**於鼠的一抗就都可以用這個二抗進行檢測,提高了通用性。
免疫熒光二抗的選擇求教
6樓:南京金益柏生物科技****
要是你要用的抗體不就行了,國產跟國外的差別也不是那麼大好不好?
建議樓主先做試驗試試,個人覺得影響不會很大。只要fitc標記的羊抗鼠抗體是合格產品即可。
經費有限的話,只要得到試驗結果不就行了。
免疫熒光染色gs是一抗還是二抗
7樓:魅力啄木鳥
免疫熒光染色快捷,靈敏.
標本冰凍切片,石蠟切片?切片厚薄?影響抗孵育間.
選用較佳抗工作濃度.
二抗需a液b液室溫混合15鍾再用.
標本需儲存-20度.
免疫熒光封片時的方法和配方,細胞免疫熒光怎麼封片
50 的緩衝甘油,等體積的甘油 等體積的雙蒸水 細胞免疫熒光怎麼封片 細胞bai 免疫熒光的詳細操作du步驟 1,取出細胞爬片zhi放到35mm或60mm用過的細dao胞培養皿裡,pbs洗三遍。注回意有的時候答作的細胞爬片可能比較小,因此夾取的時候要小心。2,4 多聚甲醛固定20分鐘,pbs洗三遍。...
繼續求助免疫熒光檢測,繼續求助免疫熒光檢測NF
由於nf kb採用免疫熒光檢測可能會出現非特異性結合,一般轉核觀察nf kb採用熒光效果欠佳,建議是否考慮採用鐳射共聚焦檢測,其效果要比前者好多了。供參考。求助免疫熒光pi染核問題 細胞試驗指南上dapi染核是在孵育完二抗之後,估計pi也可以在這時加。在論壇中查到的濃度不一,有10 50 m,有5u...
共定位免疫熒光是什麼,做免疫熒光抗體選擇問題。
免疫熒光可以用於共定位,但也可以用於很多其他應用。共定位不能夠說是免疫熒光的主要用途。一樓回答有助於理解共定位,但是 加上紅色 綠色熒光蛋白的標籤 這種說法並不是免疫熒光的做法。在免疫熒光中,與目標蛋白相結合的是帶有熒光分子基團的抗體,此種抗體雖然發熒光,但不稱為熒光蛋白。另外,共定位不能夠用於證明...