在用比色法檢測細胞活力實驗中可否用其他染料代替MTT

2021-05-05 18:58:24 字數 2344 閱讀 1086

1樓:匿名使用者

我找到一個不一樣的方法,不知是否有幫助:

mtt法

mtt法又稱mtt比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性mtt還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(formazan)並沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞碸(dmso)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。

在一定細胞數範圍內,mtt結晶形成的量與細胞數成正比。mtt法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、細胞增殖測定、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。mtt法的特點是靈敏度高、**經濟實惠。

不過,mtt法是有缺陷的,是因為mtt經還原所產生的甲瓚產物不溶於水,需被溶解後才能檢測。這不僅使檢測時的工作量增加,也會對實驗結果的準確性產生影響,而且溶解甲瓚的有機溶劑對實驗者也有損害。

cck-8法(或稱wst-8法)細胞活性檢測方法簡介cck-8細胞活性檢測試劑中含有wst-8,化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2h-四唑單鈉鹽],它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-methoxy pms)的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物(formazan)。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。

用酶聯免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。該方法已被廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞增殖試驗、細胞毒性試驗以及藥敏試驗等。cck-8法的優點:

1、使用方便,省去了洗滌細胞,不需要放射性同位素和有機溶劑; 2、cck-8法能快速檢測; 3、cck-8法的檢測靈敏度很高,甚至可以測定較低細胞密度; 4、cck-8法的重複性優於mtt法; 5、cck-8法對細胞毒性小; 6、cck-8細胞活性檢測試劑中為1瓶溶液,毋需預製,即開即用。 cck-8法的缺點: 1、與mtt法相比,cck-8和xtt的**比較貴。

2、cck-8試劑的顏色為淡紅色,與含酚紅的培養基顏色接近,不注意的話容易產生漏加或多加。

2樓:阿拉伯的芝麻

測細胞活力有很多方法,不同條件能用的方法不一樣。如mtt、cck-8,xtt等。mtt毒性較大,但是便宜,通常用於貼壁細胞,吸去後加dmso溶解,對於懸浮細胞,有用mtt改良法的,需要參考相關文獻。

懸浮細胞常用cck-8,cck-8是可以加到板裡,直接測od的,但是要做對照,去除本底反應的影響,因為cck-8的靈敏度較高,尤其要注意避光。xtt要現配現用。總體而言,還是用mtt比較多,不知你為何要換其他的,說出原因才能幫你。

貼壁細胞毒性檢測用mtt mts,cck8哪種效果好

3樓:匿名使用者

齊氏生物細胞生物學產品專家認為cck8更好些,優點如下:

1)使用方便,省去了洗滌細胞,不需要放射性同位素和有機溶劑;

2)cck-8法能快速檢測;

3)cck-8法的檢測靈敏度很高,甚至可以測定較低細胞密度;

4)cck-8法的重複性優於mtt 法;

5)cck-8法對細胞毒性小;

6)cck-8細胞活性檢測試劑中為1瓶溶液,毋需預製,即開即用。

當然,與mtt相比,cck8有以下2點不足:

1)與mtt法相 比,cck8和xtt的**比較貴。

2)cck8試劑的顏色為淡紅色,與含酚紅的培養基顏色接近,不注意的話容易產生漏加或多加。

為更好了解cck8、mtt、    xtt等檢測方法,齊氏生物細胞生物學產品專家制定下表,以供參考:

mtt法和cck法是否適用於所有細胞進行細胞活性的檢測

4樓:匿名使用者

mtt法又稱mtt比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。

mtt比色法細胞活力檢測實驗中有哪些注意事項?

5樓:匿名使用者

博凌科為解答:(1)選擇適當的細胞接種濃度。一般情況下,96孔培養板的內貼壁細胞長滿時約有lo6個細胞。

但由於不同細胞貼壁後面積差異很大,因此,在進行mtt比色法細胞活力檢測實驗前,掌握每一種細胞的貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞數條件下的生長曲線,確定實驗中每孔的接種細胞數和培養時間,以保證培養終止致細胞過滿。這樣,才能保證形成酌量的mtt結晶,與細胞數量呈線性關係。 (2)避免血清干擾。

用含15%胎牛血清培養液培養細胞時,高濃度的血清物質會影響實驗孔的光吸收值。由於實驗本底增加,會使實驗敏感。因此,一般選擇濃度小於10%胎牛血清的培養液進行。

在呈色後,儘量吸淨培養孔內殘餘培養液。3)設空白對照。與實驗孔平行設不加細胞只加培養液的空白孔。

其它實驗步驟保持一致。最後比色時,以空白孔調零。

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