1樓：匿名使用者
過程有點小複雜下面是我回答別人的問題的答案，你可以參考：
1.得到目的基因：設計引物（引物上帶有酶切位點）→進行pcr，膠**，酶切，再膠**，得到帶有粘性末端的目的基因→將目的片段連線到具有相同粘性末端的pet載體上
2．得到目的蛋白：將連線好的帶有目的片段的載體轉入到dh5α菌系中，將菌塗布與相應的抗性lb培養過夜→挑菌→接到相應抗性的液態lb中，搖菌過夜→提取質粒，進行pcr鑑定與酶切鑑定確定轉入的不是空質粒→送測→將的到地帶有目的蛋白基因的質粒轉入到bl21（de3）菌系中→誘導表達蛋白→進行sds-page檢測是否表達出正確大小目的蛋白→大量誘導→得到表達蛋白的de3
3.純化目的蛋白：將菌進行超聲破碎→引用ni-his結合樹脂4℃結合過夜→應用不同洗液洗脫得到純化的目的蛋白→應用bsa對蛋白含量進行定量
4.應用得到的純化目的蛋白150mg目的蛋白+弗氏完全佐劑對兔子進行一免，以後每次應用150mg目的蛋白+弗氏不完全佐劑加強免疫2-3次（兩週加強一次）→最後一次免疫10天后採血→這樣就製備得到兔高免血清
5.純化抗體（可做可不做）：應用抗體純化試劑盒對得到的血清進行純化，得到純化的兔免目的蛋白的多克隆抗體
2樓：匿名使用者
這個很簡單，你將表達這種藥物的基因匯入到質粒中，首先進行pcr和雙酶切篩選，篩選帶用目的基因的克隆樣本。在對克隆樣本分別進行northern blot和werthern blot，在mrna水平和蛋白表達水平確定其表達了
抗性基因或標記基因在質粒上的話，它怎麼起到檢驗目的基因的作用？
3樓：養你過年吃肉
抗性基因或標copy
記基因在質粒上是為了bai檢驗質粒是
du否被轉入菌體中。zhi
如果你的質粒是已經構建好，而且dao鑑定正確的，沒有空載體質粒，那麼，當你轉化後，在篩選平板上轉化（因為轉化不是100%的效率，有些菌是沒有質粒轉入的），只有轉入了該質粒的菌才能長起來，也就意味著這菌是帶有你的目的基因。另外，抗性基因和標記基因（如營養缺陷基因）給予菌體以選擇壓力，有利於質粒在菌體內的大量擴增。
另一種情況，比如你做連線實驗，把目的基因片段和酶切質粒連線，這時，連線效率更不會是100%，當你把連線產物轉入感受態細菌，只要轉入了該質粒（無論是空載體還是陽性載體），菌都能長起來，沒轉入的就長不起來，起到第一步篩選。要篩選你的陽性克隆，還需進一步檢驗，比如pcr或者提質粒酶切。
純屬手打，歡迎繼續討論，祝愉快！
4樓：匿名使用者
沒有必然聯絡，目的基因無法直接檢測出是否成功匯入，要看是否有相應翻譯出的蛋白質。
標記基因就是為了更簡便的檢測出目的基因的匯入，便於篩選、培養而插入的。
5樓：匿名使用者
質粒上既有抗性基因又有目的基因，抗性基因較容易檢出，則可確定含目的基因的表達載體質粒已匯入受體細胞。
6樓：塞森巴茂彥
抗性bai基因是放在特定的條du件下檢測的、所以有就zhi能活dao，沒有就不能回
活。所以抗性基因是一種標答記基因，有利於篩選含重組dna的細胞。對於你說的質粒上的基因對於大腸桿菌，極少數可以存活吧。那種是發生了基因突變活基因重組。
質粒圖譜怎麼看
設計構建一個載體，將目的基因在植物根系表達並向根細胞外分泌。請詳細寫出個步驟
已知某一基因mrna序列,如何設計實驗在相應細胞水平表達該基因編碼的蛋白質？
7樓：匿名使用者
totalrna反轉錄，純化mrna，如果知道該序列，用引物調出來後，連到克隆載體，一般t載就可以，亞克隆。
雙酶切轉到連到表達質粒載體上，如果只看表達與否，可以連一個標記基因，如gfp或者lux發光基因。
轉染到相應的細胞系，如果驗證編碼的蛋白的功能，就需要做相應的活性檢測了，具體問題具體設計實驗。
當然也可以做個western blot如果有此蛋白的抗體的話。
8樓：梁山的一個老伯伯
看我的文庫
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