1樓:龍鳳油洺月
不可以,擴增效率100%時斜率是-3.33.擴增效率=【10^-(1/a)】-1。
根據這個公式計算出來-2.6的斜率對應的擴增效率是142.45%,一般正常的擴增效率在90%~110%之間。
qpcr標準曲線斜率與擴增效率的關係
2樓:匿名使用者
擴增效率=(10^(-(1/斜率)))-1
所以當斜率=3.3時,擴增效率為100%。
如何作qpcr的標準曲線
3樓:夏娃的夏天
作qpcr的標準曲線可以用pcr-elisa法作。
具體如下:
pcr-elisa法:
利用地高辛或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合;
再加入抗地高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,最終酶使底物顯色。
常規的pcr-elisa法只是定性實驗,加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。
通過測定一系列已知組分的標準物質的某理化性質,從而得到該性質的數值所組成的曲線。
擴充套件資料:
實時熒光定量pcr技術,在pcr反應體系中加入熒光基團,利用熒光訊號積累實時監測整個pcr程序,最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法:
1、sybrgreeni法:
在pcr反應體系中,加入過量sybr熒光染料,sybr熒光染料特異性地摻入dna雙鏈後,發射熒光訊號。
而不摻入鏈中的sybr染料分子不會發射任何熒光訊號,從而保證熒光訊號的增加與pcr產物的增加完全同步。
sybr定量pcr擴增熒光曲線圖、pcr產物熔解曲線圖(單一峰圖表明pcr擴增產物的單一性)。
2、taqman探針法:
探針完整時,報告基團發射的熒光訊號被淬滅基團吸收;
pcr擴增時,taq酶的5』-3』外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光訊號。
即每擴增一條dna鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光訊號的累積與pcr產物的形成完全同步。
pcr反應的前15個迴圈的熒光訊號作為熒光本底訊號,熒光閾值的預設(預設)設定是3-15個迴圈的熒光訊號的標準偏差的10倍,即:threshold = 10*sdcycle 3-15。
利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線,其中橫座標代表起始拷貝數的對數,縱座標代ct值。因此,只要獲得未知樣品的ct值,即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
曲線中的斜率怎麼算 40
4樓:匿名使用者
曲線中的斜率?有點不嚴謹。
曲線在某一點的【曲率半徑】?
曲線在某一點的【切線的斜率】?
【切線的斜率】,就求一下導函式(就是切線的傾斜角的正切),再把那個點的資料代入。
【曲率半徑】,看一下附圖。
5樓:匿名使用者
如果你是大學生的話,應該知道,導數的幾何意義——就是斜率!
怎麼算?求導數啊。
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