請教酶切後,片段直接用無水乙醇沉澱的方法

1樓:匿名使用者

把酶切體系先加入等體積氯仿抽提,然版後離權心去掉氯仿,取水層,加入2倍體積的冷乙醇,混勻放入低溫冰箱進行醇沉。然後再離心吸掉乙醇晾乾,用純水溶解就行了

需要注意的就是醇沉之後的離心,因為連線體系一般都是很小的10ul左右,所以沉澱下來的dna是肉眼根本看不到的,所以可以在離心的時候記住ep管放的方向,那樣就能猜出沉澱在管的什麼位置.吸乙醇的時候要小心避開。

酶切的的水一定要用無核酸酶水嗎

2樓:

酶切後片段直接用無水乙醇沉澱的方法

把酶切體系先加入等體積氯仿抽提,然

版後離心去權掉氯仿,取水層,加入2倍體積的冷乙醇,混勻放入低溫冰箱進行醇沉。然後再離心吸掉乙醇晾乾,用純水溶解就行了

酶切後的dna可直接乙醇沉澱嗎

3樓:北京索萊寶科技****

可以,但是最

來好使用醋酸銨,自也可以不加,**效率可能會低一點,操作步驟:

方法一:

將憶確定的**產物溶液於加有300 μl te緩衝液的滅菌的1.5 ml eppendorf管中。

加入等體積酚-氯仿-異戊醇,搖晃均勻。

12000 rpm離心5 min。

小心將水相移到另一1.5 ml eppendorf管中,加入2.5~3倍體積(780 μl即可)預冷無水乙醇,以及10%水相體積的3 m naac(ph 5.2)。

置液氮3 min,取出後可置於-20°C放幾min。小心防止管子爆裂。

12000 rpm離心10 min。

迅速棄上清,一般在管底會有針尖大小的沉澱物,小心用無水乙醇清洗後置於恆溫器上乾燥(55°C)5~10 min至無乙醇氣味,再加入20 μl ddh2o溶解。

取20 μl電泳定量後-20°C儲存備用。

方法二:

先把乙醇-20度預冷,酶切完後加入2倍體積的無水乙醇,-20度放置10min以上,12000rpm離心10min,管底出現白色沉澱,倒掉上清,換用70%乙醇重複一次,再用水溶解白色沉澱既可,損失率蠻大,**率只有40%,或者更低。