1樓：匿名使用者
熒光的原理是某些物質會在高強度的短波長光線照射下，會發出波長稍長的發射光（熒光）。
而我們一般都是觀察被激發熒光基團所發射出來的波長稍長的發射光（熒光）。
但是激發的光會很強，所以我們就需要把激發的光全部濾去，這樣才可以看到熒光基團的發射光（熒光）。
熒光顯微鏡一般都用高強度的汞燈做激發光源。使用濾色片把不需要的光濾去，只留下激發熒光集團的高強度很純的光線。這個單色的光線通過物鏡照射到樣本上之後，樣本會被激發出發射光（熒光），熒光和激發光都會沿著物鏡光路返回，這樣的話，就需要用一個二相色鏡把激發光濾去，只讓我們需要看到的熒光透過。
這個熒光沿著顯微鏡的光路最後到達目鏡下，然後進入我們的眼睛，我們就可以看到熒光基團所發出來的熒光了。
注：在熒光顯微鏡中，最核心的是 1 熒光光源，因為熒光需要高強度的光才可以被激發出來，我們一般都用汞燈，另外還有長壽命金屬鹵素燈，當然還有鐳射。2 激發塊（幾個濾色塊組成的元件，一般有激發光濾色片、二相色鏡、發射光濾色片），因為我們的熒光基團都是在特定波長的光線下才可以激發，並且被激發的發射光也具有特定波長。
所以需要選擇合適的激發塊（主要是選擇激發光濾色片、二相色鏡、發射光濾色片這三個的可以通過的光線波長等引數）。
另外物鏡也對熒光顯微鏡有很大影響。因為只有高檔次的物鏡才可以提供完好的色差矯正。
2樓：匿名使用者
某些物質在一定波長光(如紫外光)的照射下，在極短時間內所發出來的比照射光波長更長的可見光
3樓：匿名使用者
用特殊波段的光照射標本片，以此來判斷是否含有某類物質，或通過光的強弱來觀察它們的變化！
4樓：南郊野人
利用特殊光線，將經過特殊材料染色的標本放在顯微鏡下，經行激發，已達到對比的效果。
熒光顯微鏡的用途
5樓：匿名使用者
熒光顯微鏡是用來看熒游標本的，它的波長短，普通顯微鏡是用普通可見光源看標本的。
原理:熒光鏡檢術是用短波長的光線照射用熒光素染色過的被檢物體，使之受激發後而產生長波長的熒光，然後觀察。優點：
6樓：匿名使用者
以紫外線為光源， 用以照射被檢物體， 使之發出熒光， 然後在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用於研究細胞內物質的吸收、運輸、化學物質的分佈及定位等。
細胞中有些物質，如葉綠素等，受紫外線照射後可發熒光；另有一些物質本身雖不能發熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色後，經紫外線照射亦可發熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。
熒光顯微鏡和普通顯微鏡有以下的區別：
1.照明方式通常為落射式，即光源通過物鏡投射於樣品上；
2.光源為紫外光，波長較短，分辨力高於普通顯微鏡；
3.有兩個特殊的濾光片，光源前的用以濾除可見光，目鏡和物鏡之間的用於濾除紫外線，用以保護人目。
7樓：匿名使用者
體視熒光顯微鏡使用方法與注意事項
使用方法：
(1)將材料片放在載物臺上。
(2)開啟熒光顯微鏡穩壓器．然後按下啟動組點燃紫外燈15min內不得關閉，關閉後3min內不得再啟動。
(3)將激發濾光片轉至v，分色片調到v，選用495或475nm阻擋濾光片。
(4)選用uvfl40、uvfl100熒光接物鏡鏡檢。
(5)在玻片上加無熒光油，先用40 x，再用100 x調焦鏡檢．呈現熒光。
(7)因熒光物質受紫外光照射時隨時間的增長熒光逐漸變弱，因此鏡檢時應經常變換視野。
(8)亦可用uvfl10或uvfl20低倍鏡鏡檢材料(用低倍鏡時不加無熒光油)。
熒光影象的記錄方法：
熒光顯微鏡所看到的熒光影象，一是具有形態學特徵，二是具有熒光的顏色和亮度，在判斷結果時，必須將二者結合起來綜合判斷。結果記錄根據主觀指標，即憑工作者目力觀察。作為一般定性觀察，基本上可靠的。
隨著技術科學的發展，在不同程度上採用客觀指標記錄判斷結果，如用細胞分光光度計，影象分析儀等儀器。但這些儀器記錄的結果，也必須結合主觀的判斷。
熒光顯微鏡攝影技術對於記錄熒光影象十分必要，由於熒光很易褪色減弱，要即時攝影記錄結果。方法與普通顯微攝影技術基本相同。只是需要採用高速感光膠片如asa200以上或24。
以上。因紫外光對熒光猝滅作用大，如fitc的標記物，在紫外光下照射30s，熒光亮度降低50%。所以，**速度太慢，就不能將熒光影象拍攝下來。
一般研究型熒光顯微鏡都有半自動或全自動顯微攝影系統裝置。
注意事項：
（1）嚴格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作，不要隨意改變程式。
（2）應在暗室中進行檢查。進入暗室後，接上電源，點燃超高壓汞燈5～15min，待光源發出強光穩定後，眼睛完全適應暗室，再開始觀察標本。
（3）防止紫外線對眼睛的損害，在調整光源時應戴上防護眼鏡。
（4）檢查時間每次以1～2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發光強度逐漸下降，熒光減弱；標本受紫外線照射3～5min後，熒光也明顯減弱；所以，最多不得超過2～3h。
（5）熒光顯微鏡光源壽命有限，標本應集中檢查，以節 省時間，保護光源。天熱時，應加電扇散熱降溫，新換燈泡應從開始就記錄使用時間。燈熄滅後欲再用時，須待燈泡充分冷卻後才能點燃。
一天中應避免數次點燃光源。
（6）標本染色後立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑料袋中4℃儲存，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發。
（7）熒光亮度的判斷標準：一般分為四級，即「一」—無或可見微弱熒光。「+」—僅能見明確可見的熒光。「++」—可見有明亮
求問如何用熒光顯微鏡研究細胞骨架? 其基本原理是什麼?
8樓：中色
用熒光顯微鏡研究細胞骨架主要是基於兩方面的原理:一是組成細胞骨架的蛋白亞基能夠同回小分子的答熒光染料共價結合, 使細胞骨架帶上熒游標記, 發出熒光。二是可以製備細胞骨架的熒光抗體, 然後用熒光抗體進行細胞骨架的研究。
藉助於這兩方面原理, 可用熒光顯微鏡研究細胞骨架的動力學。例如，用小分子的熒光染料標記細胞骨架的蛋白亞基, 就可以追蹤細胞骨架蛋白在細胞活動中的作用，包括組裝、去組裝、物質運輸等。這種方法還有一個好處，就是在活細胞時就可以觀察。
可用熒光抗體研究以很低濃度存在的蛋白質在細胞內的位置, 因為標記的熒光抗體同特異的蛋白具有很高的親和性, 只要有相應的蛋白存在, 就一定會有反應, 因為這種反應是特異的, 通過熒光顯微鏡觀察就可確定。熒光抗體既可以直接注射活細胞進行反應，也可以加到固定的細胞或組織切片中進行反應和分析。用這種方法對微管、肌動蛋白纖維、中間纖維進行了成功定位。
熒光顯微鏡的工作原理
9樓：刷粉勒僁
多采用200w的超高壓汞燈作光源，它是用石英玻璃製作，中間呈球形，內充一定數量的汞，工作時由兩個電極間放電，引起水銀蒸發，球內氣壓迅速升高，當水銀完全蒸發時，可達50～70個標準大氣壓力，這一過程一般約需5～15min。超高壓汞燈的發光是電極間放電使水銀分子不斷解離和還原過程中發射光量子的結果。它發射很強的紫外和藍紫光，足以激發各類熒光物質，因此，為熒光顯微鏡普遍採用。
超高壓汞燈也散發大量熱能。因此，燈室必須有良好的散熱條件，工作環境溫度不宜太高。
新型超高壓汞燈在使用初期不需高電壓即可引燃，使用一些時間後，則需要高壓啟動（約為15000v），啟動後，維持工作電壓一般為50～60v，工作電流約4a左右。200w超高壓汞燈的平均壽命，在每次使用2h的情況下約為200h，開動一次工作時間愈短，則壽命愈短，如開一次只工作20min，則壽命降低50%。因此，使用時儘量減少啟動次數。
燈泡在使用過程中，其光效是逐漸降低的。燈熄滅後要等待冷卻才能重新啟動。點燃燈泡後不可立即關閉，以免水銀蒸發不完全而損壞電極，一般需要等15min。
由於超高壓汞燈壓力很高，紫外線強烈，因此燈泡必須置燈室中方可點燃，以免傷害眼睛和發生**時造成操作。
超高壓汞燈（100w或200w）光源的電路和包括變壓、鎮流、啟動幾個部分。在燈室上有調節燈泡發光中心的系統，燈泡球部後面安裝有鍍鋁的凹面反射鏡，前面安裝有集光透鏡。
國產超高壓汞燈gcq-200型效能良好，可以代替hbo-200等型的進口燈泡，平均壽命在200h以上，**也比較低。
我國研製的一種簡易輕便型高色溫溴鎢熒光光源裝置，體積小，重量輕，功率小，交、直流兩用（自帶直流電源），易於攜帶，使用方便，已推廣應用。 濾色系統是熒光顯微鏡的重要部位，由激發濾板和壓制濾板組成。濾板型號，各廠家名稱常不統一。
濾板一般都以基本色調命名，前面字母代表色調，後面字母代表玻璃，數字代表型號特點。如德國產品（schott）bg12，就是種藍色玻璃，b是藍色的第一個字母，g是玻璃的第一個字母；我國產品的名稱已統一用拼音字母表示，如相當於bg12的藍色濾板名為qb24，q是青色（藍色）拼音的第一個字母，b是玻璃拼音的第一個字母。不過有的濾板也可以透光分界濾長命名，如k530，就是表示壓制濾長530nm以下的光而透過530nm以上的光。
還有的廠家的濾板完全以數字命名，如美國corning廠的no：5-58，即相當於bg12。
1．激發濾板 根據光源和熒光色素的特點，可選用以下三類激發濾板，提供一定波長範圍的激發光。
紫外光激發濾板：此濾板可使400nm以下的紫外光透過，阻擋400nm以上的可見光通過。常用型號為ug-1或ug-5，外加一塊bg-38，以除去紅色尾波。
紫外藍光激發濾板：此濾板可使300～450nm範圍內的光通過。常用型號為zb-2或zb-3，外加bg-38。
紫藍光激發濾板：它可使350～490nm的光通過。常用型號為qb24（bg12）。
最大吸收峰在500nm以上者的熒光素（如羅達明色素）可用藍綠濾板（如b-7）激發。
開始採用金屬膜干涉濾板，由於針對性強，波長適當，因而激發效果比較玻璃濾更好。如西德leitz廠的fitc專用kp490濾板和羅達明的s546綠色濾板，均遠比玻璃濾板效果好。
激發濾板分薄厚兩種，一般暗視野選用薄濾板，亮視野熒光顯微鏡可選用厚一些。基本要求是以獲得最明亮的熒光和最好的背景為準。
2．壓制濾板 壓制濾板的作用是完全阻擋激發光通過，提供相應波長範圍的熒光。與激發濾板相對應，常用以下3種壓制濾板：
紫外光壓制濾板：可通過可見光、阻擋紫外光通過。能與ug-1或ug-5組合。常用gg-3k430或gg-6k460。
紫藍光壓制濾板：能通過510nm以上波長的光（綠到紅），能與bg-12組合。通常用og-4k510或og-1k530。
紫外紫光壓制濾板：能通過460nm以上波長的光（藍到紅），可與bg-3組合，常用og-11k470ak 490，k510。 專為熒光顯微鏡設計製作的聚光器是用石英玻璃或其他透紫外光的玻璃製成。
分明視野聚光器的暗視野聚光器兩種。還有相差熒光聚光器。
1．明視野聚光器 在一般熒光顯微鏡上多用明視野聚光器，它具有聚光力強，使用方便，特別適於低、中倍放大的標本觀察。
2．暗視野聚光器 暗視野聚光器在熒光顯微鏡中的應用日益廣泛。因為激發光不直接進入物鏡，因而除散射光外，激發光也不進入目鏡，可以使用薄的激發濾板，增強激發光的強度，壓制濾板也可以很薄，因紫外光激發時，可用無色濾板（不透過紫外）而仍然產生黑暗的背景。從而增強了熒光影象的亮度和反襯度，提高了影象的質量，觀察舒適，可能發現亮視野難以分辨的細微熒光顆粒。
3．相差熒光聚光器 相差聚光器與相差物鏡配合使用，可同時進行相差和熒光聯合觀察，既能看到熒光影象，又能看到相差影象，有助於熒光的定位準確。一般熒光觀察很少需要這種聚光器。 熒光顯微鏡ccd一般具有良好的弱光捕捉能力，能夠捕捉到極其微弱的熒光，因此成像能力好，此外，很多熒光冷ccd生產上搜對此類ccd作了製冷處理，使得此類ccd的噪音大大降低，訊雜比得以很大的提高。
由於其方便應用效果，此類ccd相機被廣泛應用於熒光顯微鏡。
fitc標記的二抗熒光顯微鏡用什麼波長激發
fitc的激發波長是490nm和494nm,發射波長是520nm和525nm。大學理工類都有什麼專業 10 理工類專業 數學與應用數學 資訊與計算科學 物理學 應用化學 生物技術 地質學 大氣科學類 理論與應用力學 電子資訊科學與技術 環境科學 採礦工程 石油工程 冶金工程 機械設計製造及其自動化 ...
免疫熒光顯微鏡拍照出來的效果怎么樣
免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體 或抗原 上，與其相應的抗原 或抗體 結合後，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。拍出來效果不錯，可以做三色的。你可以問問中洪博元的技術人員看看 請教免疫熒光顯微鏡拍照的問題 怎樣做才可以拍攝出高清晰 熒光顯微鏡下你人眼是不是觀察清楚了，是不...
求問如何用熒光顯微鏡研究細胞骨架其基本原理是什麼
用熒光顯微鏡研究細胞骨架主要是基於兩方面的原理 一是組成細胞骨架的蛋白亞基能夠同回小分子的答熒光染料共價結合,使細胞骨架帶上熒游標記,發出熒光。二是可以製備細胞骨架的熒光抗體,然後用熒光抗體進行細胞骨架的研究。藉助於這兩方面原理,可用熒光顯微鏡研究細胞骨架的動力學。例如,用小分子的熒光染料標記細胞骨...