1樓:中色
用熒光顯微鏡研究細胞骨架主要是基於兩方面的原理:一是組成細胞骨架的蛋白亞基能夠同回小分子的答熒光染料共價結合, 使細胞骨架帶上熒游標記, 發出熒光。二是可以製備細胞骨架的熒光抗體, 然後用熒光抗體進行細胞骨架的研究。
藉助於這兩方面原理, 可用熒光顯微鏡研究細胞骨架的動力學。例如,用小分子的熒光染料標記細胞骨架的蛋白亞基, 就可以追蹤細胞骨架蛋白在細胞活動中的作用,包括組裝、去組裝、物質運輸等。這種方法還有一個好處,就是在活細胞時就可以觀察。
可用熒光抗體研究以很低濃度存在的蛋白質在細胞內的位置, 因為標記的熒光抗體同特異的蛋白具有很高的親和性, 只要有相應的蛋白存在, 就一定會有反應, 因為這種反應是特異的, 通過熒光顯微鏡觀察就可確定。熒光抗體既可以直接注射活細胞進行反應,也可以加到固定的細胞或組織切片中進行反應和分析。用這種方法對微管、肌動蛋白纖維、中間纖維進行了成功定位。
熒光顯微鏡的工作原理
2樓:刷粉勒僁
多采用200w的超高壓汞燈作光源,它是用石英玻璃製作,中間呈球形,內充一定數量的汞,工作時由兩個電極間放電,引起水銀蒸發,球內氣壓迅速升高,當水銀完全蒸發時,可達50~70個標準大氣壓力,這一過程一般約需5~15min。超高壓汞燈的發光是電極間放電使水銀分子不斷解離和還原過程中發射光量子的結果。它發射很強的紫外和藍紫光,足以激發各類熒光物質,因此,為熒光顯微鏡普遍採用。
超高壓汞燈也散發大量熱能。因此,燈室必須有良好的散熱條件,工作環境溫度不宜太高。
新型超高壓汞燈在使用初期不需高電壓即可引燃,使用一些時間後,則需要高壓啟動(約為15000v),啟動後,維持工作電壓一般為50~60v,工作電流約4a左右。200w超高壓汞燈的平均壽命,在每次使用2h的情況下約為200h,開動一次工作時間愈短,則壽命愈短,如開一次只工作20min,則壽命降低50%。因此,使用時儘量減少啟動次數。
燈泡在使用過程中,其光效是逐漸降低的。燈熄滅後要等待冷卻才能重新啟動。點燃燈泡後不可立即關閉,以免水銀蒸發不完全而損壞電極,一般需要等15min。
由於超高壓汞燈壓力很高,紫外線強烈,因此燈泡必須置燈室中方可點燃,以免傷害眼睛和發生**時造成操作。
超高壓汞燈(100w或200w)光源的電路和包括變壓、鎮流、啟動幾個部分。在燈室上有調節燈泡發光中心的系統,燈泡球部後面安裝有鍍鋁的凹面反射鏡,前面安裝有集光透鏡。
國產超高壓汞燈gcq-200型效能良好,可以代替hbo-200等型的進口燈泡,平均壽命在200h以上,**也比較低。
我國研製的一種簡易輕便型高色溫溴鎢熒光光源裝置,體積小,重量輕,功率小,交、直流兩用(自帶直流電源),易於攜帶,使用方便,已推廣應用。 濾色系統是熒光顯微鏡的重要部位,由激發濾板和壓制濾板組成。濾板型號,各廠家名稱常不統一。
濾板一般都以基本色調命名,前面字母代表色調,後面字母代表玻璃,數字代表型號特點。如德國產品(schott)bg12,就是種藍色玻璃,b是藍色的第一個字母,g是玻璃的第一個字母;我國產品的名稱已統一用拼音字母表示,如相當於bg12的藍色濾板名為qb24,q是青色(藍色)拼音的第一個字母,b是玻璃拼音的第一個字母。不過有的濾板也可以透光分界濾長命名,如k530,就是表示壓制濾長530nm以下的光而透過530nm以上的光。
還有的廠家的濾板完全以數字命名,如美國corning廠的no:5-58,即相當於bg12。
1.激發濾板 根據光源和熒光色素的特點,可選用以下三類激發濾板,提供一定波長範圍的激發光。
紫外光激發濾板:此濾板可使400nm以下的紫外光透過,阻擋400nm以上的可見光通過。常用型號為ug-1或ug-5,外加一塊bg-38,以除去紅色尾波。
紫外藍光激發濾板:此濾板可使300~450nm範圍內的光通過。常用型號為zb-2或zb-3,外加bg-38。
紫藍光激發濾板:它可使350~490nm的光通過。常用型號為qb24(bg12)。
最大吸收峰在500nm以上者的熒光素(如羅達明色素)可用藍綠濾板(如b-7)激發。
開始採用金屬膜干涉濾板,由於針對性強,波長適當,因而激發效果比較玻璃濾更好。如西德leitz廠的fitc專用kp490濾板和羅達明的s546綠色濾板,均遠比玻璃濾板效果好。
激發濾板分薄厚兩種,一般暗視野選用薄濾板,亮視野熒光顯微鏡可選用厚一些。基本要求是以獲得最明亮的熒光和最好的背景為準。
2.壓制濾板 壓制濾板的作用是完全阻擋激發光通過,提供相應波長範圍的熒光。與激發濾板相對應,常用以下3種壓制濾板:
紫外光壓制濾板:可通過可見光、阻擋紫外光通過。能與ug-1或ug-5組合。常用gg-3k430或gg-6k460。
紫藍光壓制濾板:能通過510nm以上波長的光(綠到紅),能與bg-12組合。通常用og-4k510或og-1k530。
紫外紫光壓制濾板:能通過460nm以上波長的光(藍到紅),可與bg-3組合,常用og-11k470ak 490,k510。 專為熒光顯微鏡設計製作的聚光器是用石英玻璃或其他透紫外光的玻璃製成。
分明視野聚光器的暗視野聚光器兩種。還有相差熒光聚光器。
1.明視野聚光器 在一般熒光顯微鏡上多用明視野聚光器,它具有聚光力強,使用方便,特別適於低、中倍放大的標本觀察。
2.暗視野聚光器 暗視野聚光器在熒光顯微鏡中的應用日益廣泛。因為激發光不直接進入物鏡,因而除散射光外,激發光也不進入目鏡,可以使用薄的激發濾板,增強激發光的強度,壓制濾板也可以很薄,因紫外光激發時,可用無色濾板(不透過紫外)而仍然產生黑暗的背景。從而增強了熒光影象的亮度和反襯度,提高了影象的質量,觀察舒適,可能發現亮視野難以分辨的細微熒光顆粒。
3.相差熒光聚光器 相差聚光器與相差物鏡配合使用,可同時進行相差和熒光聯合觀察,既能看到熒光影象,又能看到相差影象,有助於熒光的定位準確。一般熒光觀察很少需要這種聚光器。 熒光顯微鏡ccd一般具有良好的弱光捕捉能力,能夠捕捉到極其微弱的熒光,因此成像能力好,此外,很多熒光冷ccd生產上搜對此類ccd作了製冷處理,使得此類ccd的噪音大大降低,訊雜比得以很大的提高。
由於其方便應用效果,此類ccd相機被廣泛應用於熒光顯微鏡。
大學 細胞生物學題目:在細胞骨架的研究中,微絲和微管的特異性藥物有哪些?其作用機制是什麼?
3樓:匿名使用者
微絲:細胞鬆bai弛素du:切斷微絲zhi,結合在微絲正極阻抑肌dao動蛋白聚合,破壞專微絲網路結屬構,並阻止細胞運動
鬼筆環肽:與微絲有強親和作用,使肌動蛋白纖維穩定,防止微絲解聚微管:秋水仙素:結合到未聚合的微管蛋白二聚體上,阻斷微管蛋白組裝成微管,可破壞紡錘體結構
紫杉酚:促進微管裝配,並使已形成的微管穩定
4樓:匿名使用者
對於微絲來說:
細胞鬆弛素b:切斷微絲,結合在微絲正極阻抑肌動蛋白聚回合,破壞微絲網路結答構,並阻止細胞運動
鬼筆環肽:與微絲有強親和作用,使肌動蛋白纖維穩定,防止微絲解聚。
微管:秋水仙素:結合到未聚合的微管蛋白二聚體上,阻斷微管蛋白組裝成微管,可破壞紡錘體結構。是細胞停留在**期,以加倍染色體。
紫杉醇:促進微管裝配,並使已形成的微管穩定。
1求問此題如何用夾逼準則做答案是122有
解bai 分享一 種解法。當1dukzhi其從1到n求和,dao有 k k k n k 1 即版n n 1 2 k k n n 1 n 2 2。又,n 權2 n 1 1 2 n n 1 n 2 n n k k n n 2 n k 1 2 n 1 n 2 n 2 n 1 而lim n 1 2 n n ...
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