1樓:暖萱紫菱
1.底物濃度 除選擇適合的底物外,在實際應用中更多考慮的是底物濃度。由於[s]與反應速度v成雙曲線關係,在酶活性測定時,要求[s]達到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。
2.酶濃度 在反應條件一定時,酶濃度與反應速度成正比。按照中間產物學說,只有[s]>>[e]時,酶才能被底物分子飽和,反應速度才能達到最大值。因此當標本酶活力過高時,應將標本適當稀釋後再加以測定。
3.溫度 不同的酶最適溫度可以不同,多數酶的最適溫度在37~40℃。高於或低於最適溫度,酶活性都降低。
4.離子強度和ph值 在最適ph時,酶的活性最強,高於或低於最適ph,酶的活性都降低。
5 輔助因子 某些金屬離子和維生素類輔酶是結合酶的輔助因子。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現活性,因此在酶活性測定時,就要保證輔基或輔酶的供給。
6.啟用劑 有些酶在有啟用劑存在時才有活性或活性較高。因此在酶活性測定時也,要滿足酶對啟用劑的需要。
7.抑制劑 酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制,後者又可分為競爭性抑制和非競爭性抑制。重金屬離子和砷化物對巰基酶的抑制、有機磷對羥基酶的抑制屬於不可逆抑制;丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對二氫葉酸合成酶的抑制屬於競爭性抑制;哇巴因對na+,k+-atp酶的抑制屬於非競爭性抑制.抑制劑使酶活性降低,在測定酶活性時,應避免抑制劑的影響。
2樓:匿名使用者
1保持待測材料的酶活 2在分光光度計下待測是控制反應時間
測定酶活力需要控制哪些條件
3樓:
測定酶力必須注意幾點:
(1)酶促反應程初段間內反應速度與酶濃度比隨著反應間延反應速度即逐漸降低
(2)要規定定反應條件間、溫度、ph等並酶測定程保持些反應條件恆定溫度超規定溫度士1℃ph應恆定
(3)配製底物濃度應準確且足夠底物液應加入抑制該酶力防腐劑並儲存於冰箱防止底物解
(4)標本要新鮮由於絕數酶久置力降低標本及測定應儲存於冰箱用血漿應考慮抗凝劑酶反應影響些酶血細胞、血板濃度比血清高採血、離血清應注意防止溶血白細胞破裂
(5)測定程所用儀器應絕清潔應含酶抑制物酸、鹼、蛋白沉澱劑等
4樓:卓秀梅辛致
1.底物濃度
除選擇適合的底物外,在實際應用中更多考慮的是底物濃度。由於[s]與反應速度v成雙曲線關係,在酶活性測定時,要求[s]達到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。
2.酶濃度
在反應條件一定時,酶濃度與反應速度成正比。按照中間產物學說,只有[s]>>[e]時,酶才能被底物分子飽和,反應速度才能達到最大值。因此當標本酶活力過高時,應將標本適當稀釋後再加以測定。
3.溫度
不同的酶最適溫度可以不同,多數酶的最適溫度在37~40℃。高於或低於最適溫度,酶活性都降低。
4.離子強度和ph值
在最適ph時,酶的活性最強,高於或低於最適ph,酶的活性都降低。
5輔助因子
某些金屬離子和維生素類輔酶是結合酶的輔助因子。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現活性,因此在酶活性測定時,就要保證輔基或輔酶的供給。
6.啟用劑
有些酶在有啟用劑存在時才有活性或活性較高。因此在酶活性測定時也,要滿足酶對啟用劑的需要。
7.抑制劑
酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制,後者又可分為競爭性抑制和非競爭性抑制。重金屬離子和砷化物對巰基酶的抑制、有機磷對羥基酶的抑制屬於不可逆抑制;丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對二氫葉酸合成酶的抑制屬於競爭性抑制;哇巴因對na+,k+-atp酶的抑制屬於非競爭性抑制.抑制劑使酶活性降低,在測定酶活性時,應避免抑制劑的影響。
5樓:聞時芳鄧嫻
最適測定條件與條件的優化
國際臨床化學聯合會(ifcc)和中華醫學會檢驗分會均推薦選擇在「最適條件」下測定酶活性濃度。所謂最適條件是指能滿足酶促反應速度達到最大反應速度所需的條件。包括:
①合適的底物和最適底物濃度;②理想的緩衝液種類和最適離子強度;③反應液的最適ph;④最適反應溫度;⑤合適的輔因子、啟用劑濃度;⑥若是酶偶聯反應,還需要確定指示酶和輔助酶的用量;⑦合理的測定時間,包括延滯期儘量短暫,有足夠的線性期;⑧合適的樣品與反應試劑的比例;⑨足夠的檢測範圍;⑩儘量去除各種抑制劑等。
1.底物濃度
除選擇適合的底物外,在實際應用中更多考慮的是底物濃度。由於[s]與反應速度v成雙曲線關係,在酶活性測定時,要求[s]達到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。[s]範圍一般選擇在10~20km為宜,此時反應速度基本達到最大反應速度,測定的誤差在可接受範圍。
2.酶濃度
在反應條件一定時,酶濃度與反應速度成正比。按照中間產物學說,只有[s]>>[e]時,酶才能被底物分子飽和,反應速度才能達到最大值。因此當標本酶活力過高時,應將標本適當稀釋後再加以測定。
3.溫度
不同的酶最適溫度可以不同,多數酶的最適溫度在37~40℃,高於或低於最適溫度,酶活性都降低。目前,酶活性的測定溫度尚未統一,但常規實驗室多使用37℃。溫度對酶促反應的影響程度通常用溫度係數(q10)表示。
溫度係數指溫度每升高10℃,化學反應速度增加的倍數。q10通常為l~2。由溫度係數得知,溫度的變化對酶活性有著重要影響,因此要求酶活性測定要在恆溫條件下進行,溫度波動要控制在±1℃。
4.離子強度和ph值
在最適ph時,酶的活性最強,高於或低於最適ph,酶的活性都降低,多數酶的最適ph在5~8之間。在測定酶活性時,要求緩衝液具有足夠的緩衝容量,以便使ph值保持穩定。血漿或血清標本含有多種緩衝溶質,具有較強的緩衝能力。
為了防止血漿或血清標本緩衝溶質對反應液酸鹼度的影響,使ph不致偏離設定值,標本用量不宜過大,血漿或血清標本體積/反應液體積≤1/10為宜。
5輔助因子
某些金屬離子和維生素類輔酶是結合酶的輔助因子,例如zn2+是羧基肽酶的輔基,mo6+是黃嘌呤氧化酶的輔基,nadh是不需氧脫氫酶的輔酶。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現活性,因此在酶活性測定時,就要保證輔基或輔酶的供給。
6.啟用劑
有些酶在有啟用劑存在時才有活性或活性較高,例如mg2+是肌酸激酶的啟用劑,cl-是澱粉酶的啟用劑。因此在酶活性測定時,也要滿足酶對啟用劑的需要。
7.抑制劑
酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制,後者又可分為競爭性抑制和非競爭性抑制。重金屬離子和砷化物對巰基酶的抑制、有機磷對羥基酶的抑制屬於不可逆抑制;丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對二氫葉酸合成酶的抑制屬於競爭性抑制;哇巴因對na+,k+-atp酶的抑制屬於非競爭性抑制。抑制劑使酶活性降低,在測定酶活性時,應避免抑制劑的影響。
綜上所述,測定酶活性時,最適條件的選擇應該遵循最適底物濃度、最適溫度、最適ph值、滿足輔助因子和啟用劑、避免抑制劑的原則。
6樓:危霜季湛霞
1保持待測材料的酶活
2在分光光度計下待測是控制反應時間
酶活力測定的注意事項有哪些
7樓:筆中從沫
測定酶活力時,必須注意以下幾點:
1、酶促反應過程中,只有最初一段時間內反應速度與酶濃度成正比,隨著反應時間的延長,反應速度即逐漸降低。
2、要規定一定的反應條件,如時間、溫度、ph等,並在酶測定過程中保持這些反應條件的恆定,如溫度不得超過規定溫度的士1℃,ph應恆定。
3、配製的底物濃度應準確且足夠大,底物液中應加入不抑制該酶活力的防腐劑並儲存於冰箱中,以防止底物被分解。
4、標本要新鮮,由於絕大多數酶可因久置而活力降低,標本如無法及時測定,應儲存於冰箱中。用血漿時,應考慮到抗凝劑對酶反應的影響。有些酶在血細胞、血小板中的濃度比血清高,為此在採血、分離血清時,應注意防止溶血和白細胞的破裂。
5、在測定過程中,所用儀器應絕對清潔,不應含有酶的抑制物,如酸、鹼、蛋白沉澱劑等。
8樓:匿名使用者
1.底物濃度 除選擇適合的底物外,在實際應用中更多考慮的是底物濃度。由於[s]與反應速度v成雙曲線關係,在酶活性測定時,要求[s]達到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。[s]範圍一般選擇在10~20km為宜,此時反應速度基本達到最大反應速度,測定的誤差在可接受範圍。
2.酶濃度 在反應條件一定時,酶濃度與反應速度成正比。按照中間產物學說,只有[s]>>[e]時,酶才能被底物分子飽和,反應速度才能達到最大值。因此當標本酶活力過高時,應將標本適當稀釋後再加以測定。
3.溫度 不同的酶最適溫度可以不同,多數酶的最適溫度在37~40℃,高於或低於最適溫度,酶活性都降低。目前,酶活性的測定溫度尚未統一,但常規實驗室多使用37℃。溫度對酶促反應的影響程度通常用溫度係數(q10)表示。
溫度係數指溫度每升高10℃,化學反應速度增加的倍數。q10通常為l~2。由溫度係數得知,溫度的變化對酶活性有著重要影響,因此要求酶活性測定要在恆溫條件下進行,溫度波動要控制在±1℃。
4.離子強度和ph值 在最適ph時,酶的活性最強,高於或低於最適ph,酶的活性都降低,多數酶的最適ph在5~8之間。在測定酶活性時,要求緩衝液具有足夠的緩衝容量,以便使ph值保持穩定。血漿或血清標本含有多種緩衝溶質,具有較強的緩衝能力。
為了防止血漿或血清標本緩衝溶質對反應液酸鹼度的影響,使ph不致偏離設定值,標本用量不宜過大,血漿或血清標本體積/反應液體積≤1/10為宜。
5 輔助因子 某些金屬離子和維生素類輔酶是結合酶的輔助因子,例如zn2+是羧基肽酶的輔基,mo6+是黃嘌呤氧化酶的輔基,nadh是不需氧脫氫酶的輔酶。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現活性,因此在酶活性測定時,就要保證輔基或輔酶的供給。
6.啟用劑 有些酶在有啟用劑存在時才有活性或活性較高,例如mg2+是肌酸激酶的啟用劑,cl-是澱粉酶的啟用劑。因此在酶活性測定時,也要滿足酶對啟用劑的需要。
7.抑制劑 酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制,後者又可分為競爭性抑制和非競爭性抑制。重金屬離子和砷化物對巰基酶的抑制、有機磷對羥基酶的抑制屬於不可逆抑制;丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對二氫葉酸合成酶的抑制屬於競爭性抑制;哇巴因對na+,k+-atp酶的抑制屬於非競爭性抑制。抑制劑使酶活性降低,在測定酶活性時,應避免抑制劑的影響。
綜上所述,測定酶活性時,最適條件的選擇應該遵循最適底物濃度、最適溫度、最適ph值、滿足輔助因子和啟用劑、避免抑制劑的原則。
酶活力的常用測定方法酶活測定方法有哪些原則?最好是詳細的答案
常用的測定方法有取樣法和連續法。1 取樣法 在酶反應開始後不同的時間,從反應系統中取出一定量的反應液,並用適當方法停止其反應,再根據產物和底物在化學性質上的差別進行分析,求得單位時間內酶促反應的變化量。2 連續法 基於底物和產物在物理化學性質上的不同,在反應過程中對反應系統新增酶的變性劑以終止反應,...
為準確地測定蛋白酶的活力,在操作中應注意哪些因素
影響酶活力bai的因素du有哪些?答 酶活力是酶zhi催化某一化學反應 dao的速率來表示的回 酶活答 力的大小即酶含量的多少,可以用每克酶製劑或每毫升酶製劑含有多少酶單位來表示,酶活力的測定也就是測定酶促反應的速率。1酶濃度對酶活力的影響 酶促反應速率與酶分子的濃度呈正比,在一定範圍內,當底物分子...
熔點的測定實驗b形管有哪些注意事項
1 注意要加熱環狀部位的右側,進行熱浴。2 熔點管要乾淨,管壁要薄。3 測量時將b型管裝滿管中的環狀部分,過多的話液體沸騰會溢位。液體可裝液體石蠟等。4 當所用溫度計浸入傳溫液在6cm以上時,管長應適當增加,使露出液麵3cm以上,輕擊管壁或藉助長短適宜的潔淨玻璃管,垂直放在表面皿或其他適宜的硬質物體...