1樓：春素小皙化妝品
常用的測定方法有取樣法和連續法。
1、取樣法
在酶反應開始後不同的時間，從反應系統中取出一定量的反應液，並用適當方法停止其反應，再根據產物和底物在化學性質上的差別進行分析，求得單位時間內酶促反應的變化量。
2、連續法
基於底物和產物在物理化學性質上的不同，在反應過程中對反應系統新增酶的變性劑以終止反應，常用的連續測定法是光吸收測定法，即根據產物和底物在某一波長或波段上有明顯的特徵吸收差別而建立起來的連續觀測方法，幾乎所有的氧化還原酶都可用此法測定。
此外如熒光法、旋光法、電化學法也是常用的連續測定方法。對不易直接測定的反應，可使用酶偶聯分析法，即用過量、專一的「偶聯工具酶」，使被測反應繼續進行到某一可直接測定的階段。近年來，酶活性的測定工作正向兩個方向發展，超微量酶活的靈敏測定，實現測定過程的自動化控制。
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酶活力的大小可以用在一定條件下，它所催化的某一化學反應的轉化速率來表示，即酶催化的轉化速率越快，酶的活力就越高；反之，速率越慢，酶的活力就越低。所以，測定酶的活力就是測定酶促轉化速率。酶轉化速率可以用單位時間內單位體積中底物的減少量或產物的增加量來表示。
酶活力的測定既可以通過定量測定酶反應的產物或底物數量隨反應時間的變化，也可以通過定量測定酶反應底物中某一性質的變化，如黏度變化來測定。通常是在酶的最適ph 值和離子強度以及指定的溫度下測定酶活力。
2樓：學子莘
酶活力的測定方法：有兩種主要方法
即終止反應法和連續反應法。
終止反應法：是在恆溫反應系統中，每隔一定時間，取出一定體積的反應液，用強酸強鹼或sds以及加熱等使反應立即停止，然後用化學法放射性化學法或酶偶聯法分析產物的形成量或底物的消耗量。這是最經典的酶活力測定方法，幾乎所有的酶都可以根據這一原理設計出具體的測定方法。
連續反應法：無須終止反應，而是在酶反應過程中用光化學儀器或電化學儀器等來監測反應的進**況，對記錄結果進行分析，然後計算出酶活力。
酶活測定方法有哪些原則？最好是詳細的答案
3樓：匿名使用者
一、原則
ph值和溫度
體外測定酶活力時選擇的測定條件應儘可能接近酶在動物體內的消化環境。
干擾成分
側定酶活力時應儘可能的去除干擾成分。
底物在選擇底物時一定要用純度較高的底物，底物的反應濃度也不應太高。
酶樣的稀釋度
稀釋度要適中，過高，酶活力與產物生成量的關係就會超出線性範圍。
其他因素
酶促反應時間、反應體系的離子強度等因素也可以影 響酶活力的測定結果。因此,在酶活力體外測定時需要對這些 因素進行深人研究。
二、酶活測定方法
還原法酶與底物在特定的條件下反應,酶可以促使底物釋放出還原性的基團。在此反應體系中新增化學試劑 ,酶促反應的產物可與該化學試劑發生反應,生成有色物質。通過在特定的波長下 比色 ,即可求 出還原產物的含量 ,從而計算出酶活力的大小 。
色原底物法
通過底物與特定的可溶性生色基團物質結合,合**工底物。該底物與酶發生反應後 ,生色基團可被釋放出來 ,用分光光度法即可測定顏色的深淺,在與已知標準酶所做的曲線比較後 ,即可求出待測酶的活力。
粘度法該法常用於測定纖維素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶 的活力。木聚糖和β-葡聚糖溶液通常情況下可形成極高的粘度,當酶作用於粘性底物時木聚糖和β-葡聚糖會被切割成較小的分子使其粘度大 為降低。基 於poiseuille定律我們知道 ,只要測定一定條件下溶劑和樣品溶液的運動粘度,便可計算特性粘數,並以此來判斷酶的活力。
高壓液相色譜法
酶與其底物在特定的條件下充分反應後 ,在一定的色譜條件下從反應體系中提取溶液進行色譜分析,認真記錄保留時間和色譜圖,測量各個樣的峰高和半峰高,計算出酶促反應生成物的含量 ,從而換算出酶活力的數值。
免疫學方法
常用 於酶活性分析的免疫學方法包括:免疫電泳法 、免疫凝膠擴散法。這兩種方法都是根據酶與其抗體之間可發生特定的沉澱反應 ,通過待測酶和標準酶的比較,最終確定酶活力。
免疫學方法檢側度非常靈敏,可檢側出經過極度稀釋後樣品中的酶蛋白,但其缺點是不同廠家生產的酶產品需要有不同特定的抗體發生反應。
瓊脂凝膠擴散法
將酶作用的底物與瓊脂混合熔融後 ,倒入培養皿中或載波片上製成瓊脂平板。用打孔器在瓊脂平面上打出一個約4-5mm半徑 的小孔。在點加酶樣並培養24h以後 ,用染色劑顯色或用劑顯出水解區,利用水解直徑和酶活力關係測定酶活力。
酶活力測定的注意事項有哪些
4樓：筆中從沫
測定酶活力時，必須注意以下幾點：
1、酶促反應過程中，只有最初一段時間內反應速度與酶濃度成正比，隨著反應時間的延長，反應速度即逐漸降低。
2、要規定一定的反應條件，如時間、溫度、ph等，並在酶測定過程中保持這些反應條件的恆定，如溫度不得超過規定溫度的士1℃，ph應恆定。
3、配製的底物濃度應準確且足夠大，底物液中應加入不抑制該酶活力的防腐劑並儲存於冰箱中，以防止底物被分解。
4、標本要新鮮，由於絕大多數酶可因久置而活力降低，標本如無法及時測定，應儲存於冰箱中。用血漿時，應考慮到抗凝劑對酶反應的影響。有些酶在血細胞、血小板中的濃度比血清高，為此在採血、分離血清時，應注意防止溶血和白細胞的破裂。
5、在測定過程中，所用儀器應絕對清潔，不應含有酶的抑制物，如酸、鹼、蛋白沉澱劑等。
5樓：匿名使用者
1．底物濃度 除選擇適合的底物外，在實際應用中更多考慮的是底物濃度。由於[s]與反應速度v成雙曲線關係，在酶活性測定時，要求[s]達到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。[s]範圍一般選擇在10～20km為宜，此時反應速度基本達到最大反應速度，測定的誤差在可接受範圍。
2．酶濃度 在反應條件一定時，酶濃度與反應速度成正比。按照中間產物學說，只有[s]>>[e]時，酶才能被底物分子飽和，反應速度才能達到最大值。因此當標本酶活力過高時，應將標本適當稀釋後再加以測定。
3．溫度 不同的酶最適溫度可以不同，多數酶的最適溫度在37～40℃，高於或低於最適溫度，酶活性都降低。目前，酶活性的測定溫度尚未統一，但常規實驗室多使用37℃。溫度對酶促反應的影響程度通常用溫度係數(q10)表示。
溫度係數指溫度每升高10℃，化學反應速度增加的倍數。q10通常為l～2。由溫度係數得知，溫度的變化對酶活性有著重要影響，因此要求酶活性測定要在恆溫條件下進行，溫度波動要控制在±1℃。
4．離子強度和ph值 在最適ph時，酶的活性最強，高於或低於最適ph，酶的活性都降低，多數酶的最適ph在5～8之間。在測定酶活性時，要求緩衝液具有足夠的緩衝容量，以便使ph值保持穩定。血漿或血清標本含有多種緩衝溶質，具有較強的緩衝能力。
為了防止血漿或血清標本緩衝溶質對反應液酸鹼度的影響，使ph不致偏離設定值，標本用量不宜過大，血漿或血清標本體積／反應液體積≤1／10為宜。
5 輔助因子 某些金屬離子和維生素類輔酶是結合酶的輔助因子，例如zn2+是羧基肽酶的輔基，mo6+是黃嘌呤氧化酶的輔基，nadh是不需氧脫氫酶的輔酶。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現活性，因此在酶活性測定時，就要保證輔基或輔酶的供給。
6．啟用劑 有些酶在有啟用劑存在時才有活性或活性較高，例如mg2+是肌酸激酶的啟用劑，cl-是澱粉酶的啟用劑。因此在酶活性測定時，也要滿足酶對啟用劑的需要。
7．抑制劑 酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制，後者又可分為競爭性抑制和非競爭性抑制。重金屬離子和砷化物對巰基酶的抑制、有機磷對羥基酶的抑制屬於不可逆抑制；丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對二氫葉酸合成酶的抑制屬於競爭性抑制；哇巴因對na+，k+-atp酶的抑制屬於非競爭性抑制。抑制劑使酶活性降低，在測定酶活性時，應避免抑制劑的影響。
綜上所述，測定酶活性時，最適條件的選擇應該遵循最適底物濃度、最適溫度、最適ph值、滿足輔助因子和啟用劑、避免抑制劑的原則。
什麼是酶活力測定的終點法？此法有何優缺點？
6樓：組編天下
酶活力測定常用的方法有終點法和動力學方法兩類。
終點法測定完成一定量反應所需的時間，如α-澱粉酶的活力測定。因為碘對澱粉呈現藍色反應，當澱粉溶液中加入澱粉酶後，碘的藍色反應消失而呈現紅棕色；碘對澱粉顏色反應消失的時間可表示澱粉酶活力的大小。碘對澱粉顏色反應消失花的時間越短，表示酶的活力越高。
動力學方法
測定一定時間內所起的化學反應量。
①比色法 如果酶反應的產物可與特定的化學試劑反應而生成穩定的有色溶液，且生成顏色的深淺與產物的濃度在一定的範圍內有線性關係可用此法。如蛋白酶的活力測定：蛋白酶可水解酪蛋白，產生的酪氨酸可與福林試劑反應生成穩定的藍色化合物，在一定的濃度範圍內，所生成藍色化合物顏色的深淺與酪氨酸的量之間有線性關係，可用於定量測定。
②量氣法 主要用於有氣體產生的酶促反應。如氨基酸脫羧酶、脲酶的活力測定。產生的二氧化碳量可用特製的儀器如瓦氏呼吸儀測定之。根據氣體變化和時間的關係，即可求得酶反應的速度。
③滴定法 如果產物之一是自由的酸性物質可用此法。如脂肪酶催化脂肪水解，脂肪酸的增加量代表脂肪酶的活力。
④分光光度法 利用底物和產物光吸收性質的不同，可直接測定反應混合物中底物的減少量或產物的增加量。幾乎所有的氧化還原酶都使用該法測定。如還原型輔酶ⅰ(nadh2)和輔酶ⅱ(nadph2)在340nm有吸收，而nad和nadp在該波長下無吸收，脫氫酶類可用該法測定。
該法測定迅速簡便，自動掃描分光光度計的使用對酶活力的快速準確的測定提供的極大的方便。
⑤放射測量法 是酶活力測定中較常用的一種方法。一般用放射性同位素標記底物，在反應進行到一定程度時，分離帶放射性同位素標記的產物並進行測定，就可測知反應進行的速度。常用的同位素有3h，14c，32p，35s，131i等。
如脲酶，將底物尿素用14c標記，產生的帶放射性的co2氣體可用標準計數法進行測定。
⑥酶偶聯分析 某些酶本身沒有合適的測定方法，但可偶聯另一個酶反應進行測定。其基本方法為：應用某一高度專一性的工具酶使被測酶反應能繼續進行到某一可直接連續且簡便準確測定階段的方法。
如：被測e1反應的產物b是某一脫氫酶(e2)的底物，向反應體系中加入足量的脫氫酶和nad+或nadph+，使反應由a經b繼續進行到c，然後測定nadh或nadph的特徵吸收光譜的變化，即可間接地測定e1的活力大小。如己糖激酶的活力測定即應用這一方法。
注意：使用該法要求指示酶必須很純，且具有高度的專一性，以免干擾反應而給測定帶來麻煩。
測定酶活力要注意控制哪些條件測定酶活力需要控制哪些條件
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