請問dna聚合酶活性的測定方法是什麼

2021-03-07 00:10:33 字數 4008 閱讀 9537

1樓:匿名使用者

tag:酶

活性的測定方法 酶活性測定 硝酸還原酶活性測定 dna聚合酶 taq dna聚合酶 dna測定 dna濃度的測定 dna聚合酶的結構 dna定量測定 hbv dna測定值

買二抗的時候發現,有些抗igg的抗體還有分特異抗重鏈或者輕鏈,但是一般做二抗的好像沒有分。請問各位大俠,這些有特異性的抗體能做二抗麼?其結果跟一般的二抗有區別麼?

抗igg是有三種二抗抗體:whole igg,抗輕鏈的針對f(ab』)2/fab片段的igg,抗重鏈的針對fc片段的igg。

其中whole igg是完整的抗體分子,有一個fc部分和兩個與抗原結合的fab部分,適 ...

2樓:過往再見

dna聚合酶作用於

單個的脫氧核苷酸的磷酸二酯鍵

,而dna連線酶作用於dn**段間的磷酸二酯鍵。

1、dna連線酶:

dna連線酶也稱dna黏合酶,在分子生物學中扮演一個既特殊又關鍵的角色,那就是把兩條dna黏合成一條。無論是雙股或是單股dna的黏合,dna黏合酶都可以藉由形成磷酸雙脂鍵將dna在3'端的尾端與5'端的前端連在一起。雖然在細胞內也有其他的蛋白質,例如像是dna聚合酶在其中一股dna為模版的情況下,將另一邊的dna單股斷裂端,通過聚合反應的過程形成磷酸雙脂鍵(phosphodiester bond)來黏合dna(dna連線酶將dn**段縫合起來,恢復被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸雙脂鍵)。

但是dna聚合酶的黏合過程卻只是聚合反應一個附帶的功能而已,真正在細胞內扮演dna黏合反應的工作還是以dna黏合酶為主。dna黏合酶的功能便是黏合斷裂的dna,而細胞內只有dna複製與dna修復的反應牽涉到dna斷裂的合成,因此dna黏合酶就是在上述的兩個機制扮演重要的角色。除了細胞內的黏合反應,隨著分子生物學的進展,幾乎大多數的分子生物實驗室都會利用dna黏合酶來進行重組dna的實驗,或許這也可以被規類為其另一種重要的功能。

2、dna聚合酶

dna聚合酶(dna polymerase)是細胞複製dna的重要作用酶。dna聚合酶 , 以dna為複製模板,從將dna由5'端點開始複製到3'端的酶。dna聚合酶的主要活性是催化dna的合成(在具備模板、引物、dntp等的情況下)及其相輔的活性。

真核細胞有5種dna聚合酶,分別為dna聚合酶α(定位於胞核,參與複製引發,不具5'-3'外切酶活性),β(定位於核內,參與修復,不具5'-3'外切酶活性),γ(定位於線粒體,參與線粒體複製,不具5'-3',有3'-5'外切活性),δ(定位核,參與複製,具有3'-5',不具5'-3'外切活性),ε(定位於核,參與損傷修復,具有3'-5',不具5'-3'外切活性)。

原核細胞:在大腸桿菌中,到目前為止已發現有5種dna聚合酶,分別為dna聚合酶ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ和ⅴ,都與dna鏈的延長有關。dna聚合酶i是單鏈多肽,可催化單鏈或雙鏈dna 的延長,於2023年發現;dna聚合酶ii則與低分子脫氧核苷酸鏈的延長有關;dna聚合酶iii在細胞中存在的數目不多,是促進dna鏈延長的主要酶。

dna聚合酶ⅳ和ⅴ直到2023年才被發現。

dna聚合酶有哪些活性?

3樓:中國農業出版社

klenow:dna聚合酶是emphasis:role=italice.

coliemphasis:dna聚合酶i經裂解而除去全酶中的5′→3′外切活性的肽段後,所剩餘的分子量為76ku大片段,而聚合活性和3′→5′外切活性不受影響,因此該片段也稱為klenow片段(klenow:fragment),或emphasis:

role=italice.coliemphasis:dna聚合酶i大片段(emphasis:

role=italice.coliemphasis:dna:

polymerasei:large:fragment)。

klenow:dna聚合酶的活性與emphasis:role=italice.

coliemphasis:dna聚合酶i的活性是一致的,由於沒有5′→3′外切活性,而在現代基因工程操作中使用範圍進一步擴大。

klenow:片段的主要用途是:①:補平限制酶切割dna後產生的3′凹端;

②:用[superscript32superscriptp]dntp對dn**段的3′凹端進行末端標記;

③在cdna克隆中,用於合成cdna第二鏈;

④應用sanger雙脫氧鏈末端終止法進行dna測序。除了以上作用外,klenowdna聚合酶在cdna克隆中合成第二鏈,隨機引物標記,應用於pcr反應,在體外誘變中等也有非常重要的應用。

dna聚合酶具備幾種活性?用途是什麼?

4樓:匿名使用者

[1]聚合作用:在引物rna'-oh末端,以dntp為底物,按模板dna上的指令由dnapolⅰ逐個將核苷酸加上去,就是dnapolⅰ的聚合作用。酶的專一性主要表現為新進入的脫氧核苷酸必須與模板dna配對時才有催化作用。

dntp進入結合位點後,可能使酶的構象發生變化,促進3'-oh與5'-po4結合生成磷酸二酯鍵。若是錯誤的核苷酸進入結合位點,則不能與模板配對,無法改變酶的構象而被3'-5'外切酶活性位點所識別並切除之。

[2]3'→5'外切酶活性──校對作用:這種酶活性的主要功能是從3'→5'方向識別和切除不配對的dna生長鏈末端的核苷酸。當反應體系中沒有反應底物dntp時,由於沒有聚合作用而出現暫時的遊離現象,從而被3'→5'外切酶活性所降解。

如果提高反應體系的溫度可以促進這種作用,這表明溫度升高使dna生長鏈3'末端與模板發生分離的機會更多,因而降解作用加強。當向反應體系加入dntp,而且只加放與模板互補的上述核苷酸才會使這種外切酶活性受到抑制,並繼續進行dna的合成。由此推論,3'→5'外切酶活性的主要功能是校對作用,當加入的核苷酸與模板不互補而遊離時則被3'→5'外切酶切除,以便重新在這個位置上聚合對應的核苷酸。

在某些t4噬菌體突變株中dna複製的真實性降低,而易發生突變,從此突變株分離得到的t4dna聚合酶的3'→5'外切酶活性很低。相反,另外一些具有抗突變能力的t4突變株中的t4dna聚合酶的3'→5'外切酶活性比野生型高得多,因此,其dna複製真實性好,變異率低。可見,3'→5'外切酶活性對dna複製真實性的維持是十分重要的。

[3]5'→3'外切酶活性──切除修復作用:5'→3'外切酶活性就是從5'→3'方向水解dna生長鏈前方的dna鏈,主要產生5'-脫氧核苷酸。這種酶活性只對dna上配對部分(雙鏈)磷酸二酯鍵有切割活力作用,方向是5'→3'。

每次能切除10個核苷酸,而且dna的聚合作用能刺激5'→3'外切酶活力達10倍以上。因此,這種酶活性在dna損傷的修復中可能起著重要作用。對岡崎片段5'末端rna引物的去除依賴此種外切酶活性。

[4]焦磷酸解作用:dnapolⅰ的這種活性可以催化3'末端焦磷酸解dna分子。這種作用就是無機焦磷酸分解dna生長鏈,可以認為是dna聚合作用的逆反應,而且這種水解dna鏈作用需要有模板dna的存在。

(dnmp)n+xppi←(dnmp)n-x+x(dnppp)→dna

[5]焦磷酸交換作用:催化dntp末端的ppi同無機焦磷酸的交換反應。反應式為32p32pi+dnppp←dnp32p32p+ppi→dna

dna聚合酶i有哪些活性?

5樓:中國農業出版社

emphasis:role=italice.coliemphasis:

dna聚合酶i為單鏈多肽,分子量109ku,有四種活性。(1)5′→3′dna聚合酶活性:反應底物為單鏈dna及引物(帶3′-oh基)或5′突出的雙鏈dna。

(2)5′→3′外切核酸酶活性:反應底物是雙鏈dna或dna∶rna雜交體,它可從5′端降解雙鏈dna,也降解rna∶dna中的rna(rnase:h活性)。

(3)3′→5′外切酶活性:反應底物是帶3′-oh的雙鏈dna或單鏈dna,其活性從3′-oh端降解dna,可被5′→3′聚合活性封閉,也可被帶5′磷酸的dnmp所抑制。

(4)交換(置換)反應:如果只有一種dntp存在,3′→5′外切活性將從3′-oh端降解dna,然後在該位置發生一系列連續的合成和外切反應,直到露出與該dntp互補的鹼基。

總之,在沒有dntp的情況下,外切活性占主導地位,而當存在足夠的dntp時,外切活性和合成活性將處在動態平衡中,結果使得雙鏈dna成為平末端。

dna聚合酶和rna聚合酶的區別

dna聚合酶的作用是催化磷酸二酯鍵的形成的,在dna複製和逆轉錄這些產物為dna的過程中發揮回作用的答。這些過程中是單個脫氧核苷酸聚合在一起形成dna鏈的。就像是多個小東西聚在一起,因此稱為dna聚合酶。同理rna聚合酶就是在rna複製和轉錄這些產物為rna的過程中發揮和dna聚合酶起一樣作用的。兩...

dna聚合酶的作用是什麼DNA聚合酶的作用是什麼?

1 聚合 作用 在引物rna oh末端,以dntp為底物,按模板dna上的指令由dnapol 逐個將核苷酸加上去,就是dnapol 的聚合作用。2 3 5 外切酶活性 校對作用 這種酶活性的主要功能是從3 5 方向識別和切除不配對的dna生長鏈末端的核苷酸。3 5 3 外切酶活性 切除修復作用 5 ...

內切酶,DNA連線酶,DNA聚合酶,RNA聚合酶,解

限制性核酸內切酶斷開磷酸二酯鍵,dna連線酶 dna聚合酶 rna聚合酶催化磷酸二酯鍵的形成 解旋酶斷開鹼基對之間的氫鍵。解旋酶和內切酶作用於氫鍵,dna聚合酶 dna連線酶作用於磷酸二酯鍵,rna聚合酶作用於細胞核內。內切酶斷一定序列的氫鍵 dna連線酶連線磷酸二酯鍵,rna聚合酶連線磷酸二酯鍵,...