1樓：義翹神州加油
嚴格製備樣品，重新做一次，畢竟這個是要發文章用的嘛，值得多做的。
western blot 內參跑不齊怎麼調整
2樓：考研北工大
第一，應該
來確認每個樣品表達gapdh的量自一樣，雖
bai然是持家基因，本人du覺得不同細菌可能表達量不一樣zhi，造成訊號強弱dao不一樣。可以通過考馬斯亮藍染色來確定上樣量的差異，調整上樣量一樣再檢測gapdh。
第二，內參跑不齊。一般是跑膠時電流或電壓太大。還有可能是樣品中參雜著鹽離子等其他物質也會造成跑不齊。
第三，page膠的製備也很關鍵。看到條帶訊號連在一起，一方面因為膠不好，樣品擴散，另一方面蛋白表達量 高，**時間長。
第四，轉膜的效率會不會是不一致的，一抗、二抗的接合gapdh不好。都有可能。
第五，本人在發文章做wb的時候也是做過很多次，每次都是不一樣的結果。因為wb中間的步驟太多，影響因素很多，但是還是可以控制一下的。
第六，做過多次wb還是不行，建議新鮮製備蛋白樣品。
3樓：愛我家菜菜
內參，顧bai名思義就是內部參考du。廣義的內參可zhi指任何機構搜dao
集的供內部人員參考專的信屬息資料。在我國，新聞內參特指新聞**向各級黨政機關專門呈送的一種新聞報道，是新聞的一種特殊形式。與普通的新聞不同的是，新聞內參是一種不進行公開發布的報道。
目前，我們所說的「內參」通常即指新聞內參。
western blot的內參總是做不好。。。老是條帶不一致
4樓：這_五年
條帶不一致就是蛋白定量做的不準確啊
bca法，比較精確了
一般sample凍過之後，蛋白量也會改變
最好在做wb之前測一下蛋白量，別直接用之前凍之前檢測的資料去做。
5樓：匿名使用者
1. protein - blot 之前 用bradford 測一下總蛋白量，估摸一下
2. 做完第一次後，用photoshop 軟體測一下 各個內參條帶的 光密度值，這樣可以給 第二次調整的時候 一個參考....
6樓：匿名使用者
多的樣品下次就少加點 少的就多加點 只要看起來差不多就行了
7樓：匿名使用者
1，如果是組織樣品確實不好做，可以先用0.45濾膜過濾一下
2，可以第一次做的時候多準備些煮好的樣品，上樣用一部分，其它凍-20，出來結果後根據結果再調整下一次上樣的多少，這樣不用重新凍融原來的樣品，因為沒煮過的樣品凍融再測濃度會因為一些蛋白降解和沉澱的問題導致和上次成分不一樣，
3，實在不行你就換個內參吧，actin，tubulin，gapdh，不同的細胞系或者不同的組織有時候真的差挺大的
western blot 的內參不一致，急求助
8樓：愛力玖irma老師
western blot用來檢測蛋白表達的bai變化，du而檢測表
達變化的前提就是，zhi你每dao個孔跑得總蛋
白量內是相同的，如果上樣量都不同，容還怎麼檢測不同組間目的蛋白量的區別，這樣內參就可以作為檢測蛋白上樣量是否相同的標準。內參一般選那些表達水平比較固定的一些蛋白，比如說actin，這些蛋白的表達水平不會因為你的實驗條件而改變，也就是說它始終就是表達那麼多，如果這些蛋白的表達量一樣，那麼我們就認為總的蛋白是相同的。
western blot為什麼必須要用內參
牙齒咬合不齊，牙齒咬合不齊的危害
如果你對於自己的牙齒排列不齊很困擾的話，可以矯正，校正後能達到你滿意的效果，不過，問題不大的話建議不要做，除非你對美觀很在意。你說的問題屬於深覆合覆蓋，排列不齊。有可能需要拔牙，根據情況，需要拍片後決定。矯正後肯定能解決你所說的問題，不過建議你去正規醫院，因為矯正是大事，做不好的話會給你一輩子帶來困...
英文下面對不齊,word英文下面對不齊
用格式刷刷成同樣的格式。英文單詞長短不一,有時很難完全對齊。選中整段,右鍵,bai把專案編號去掉。如du果還不行,再右zhi鍵,選段落,把首行dao懸掛去專掉。參考文獻1 9序號屬要比兩位數序號多一個空格,然後所有段落設定相同的首行懸掛。即使這樣看起來還是不會全齊,因為英文單詞長短不同,每行字數不一...
western內參用的GAPDH和B actin蛋白的分
western 內參用的gapdh分子量為146kd，檢測條帶大 約在36kd，b actin分子量為42kd。嚴謹的western blot實驗設計中要內求有良好的參容照體系，這對實驗結果分析是非常有用。要用western blot比較不同條件下或者不同組織中，目的蛋白表達量的相對多少，前提條件是...