1樓：匿名使用者
提取植物dna常用的方法是ctab法。原理：ctab是一種陽離子去汙劑,具有從低離子強度溶液中沉澱核酸與酸性多聚糖的特性。
在高離子強度的溶液中(>0.7mol/l nacl)，ctab與蛋白質和多聚糖形成複合物，只是不能沉澱核酸。通過有機溶劑抽提，去除蛋白，多糖，酚類等雜質後加入乙醇沉澱即可使核酸分離出來。
步驟如下：
1）取材料，加液氮研磨成粉末狀，迅速移入1.5 ml eppendorf管中；
（2）加入800 μl的ctab提取緩衝液，混勻（ctab在65℃水浴預熱），每5min輕輕**幾次，20min後12000 r/min，離心15 min；
（3）小心吸取上清液，加入等體積的酚：氯仿（各400μl）溶液，混勻，4℃，12000 r/min，離心10 min；
（4）小心吸取上清液，加入等體積的氯仿，混勻，4℃，12000 r/min，離心10 min。
（5）重複步驟（4）1-2次，以蛋白層不出現為止；
（6）取上清，-20℃沉澱1h，4℃，12000 r/min，離心10 min；
（7）棄去上清液，用70%乙醇洗滌沉澱2次；
（8）室溫下乾燥後（一般乾燥5-15 min），溶於30-50 μl depc去離子水中，於-20℃或者-70℃下儲存備用。
dna粗提取實驗步驟？
2樓：孫福學
一 教學目的
1.初步掌握dna的粗提取和鑑定的方法。
2.觀察提取出來的dna物質。
二 教學建議
在本實驗的教學中，教師應注意以下幾點。
1.實驗材料必須準備充足。本實驗所用的實驗材料是雞血細胞液,由活雞的鮮血經沉澱後獲得。
每組(2個學生)需用5 ml 雞血細胞液,則每班(50人)至少需要130 ml,而雞血細胞液與雞血的體積比為1:3,這樣每班至少需要390 ml 雞血細胞液。宰殺1只中等大小的活雞,一般可得120 ml 左右的鮮血,因此,1個班實驗需要買4只活雞。
如果不具備購買活雞的條件,也可以到市場售活雞處去索取雞血,但所帶燒杯中必須提前放入抗凝劑。
2.盛放雞血細胞液的容器,最好是塑料容器。雞血細胞破碎以後釋放出的dna,容易被玻璃容器吸附,由於細胞內dna的含量本來就比較少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的dna就會更少。
因此,實驗過程中最好使用塑料的燒杯和試管,這樣可以減少提取過程中dna的損失。
3.獲取較純淨的dna的關鍵步驟。
(1)充分攪拌雞血細胞液dna存在於雞血細胞的細胞核中。將雞血細胞液與蒸餾水混合以後,必須用玻璃棒沿一個方向快速攪拌,使雞血細胞加速破裂,並釋放出dna。
(2)沉澱dna時必須用冷酒精實驗前必須準備好大量的體積分數為95%的酒精,並在冰箱(至少5s以下)中至少存放24 h。
(3)正確攪拌含有懸浮物的溶液實驗步驟3、5、7,都需要用玻璃棒攪拌。教師應提醒學生注意,在進行步驟3、5時,玻璃棒不要直插燒杯底部,而且攪拌要輕緩,以便獲得較完整的dna分子。進行步驟7時,要將玻璃棒插入燒杯中溶液的中間,用手緩慢轉動510 min。
三 參考資料
實驗原理的補充介紹
1.dna的釋放 dna位於雞血細胞的細胞核中,正常情況下不會釋放出來。為了使dna從細胞核中釋放出來,實驗中採用了向雞血細胞液中加入蒸餾水並且攪拌的方法。
蒸餾水對於雞血細胞來說,是一種低滲液體,水分可以大量進入血細胞內,使血細胞破裂。同時,再加上攪拌的機械作用,就加速了雞血細胞的破裂(細胞膜和核膜的破裂),於是釋放出dna,當然也有rna。但是,釋放出來的大量dna和rna往往與蛋白質結合在一起。
2.將dna與蛋白質分離 根據二者的特性,即在濃度較高的氯化鈉溶液(物質的量濃度為2 mol/l )中,核蛋白容易解聚,遊離出dna。而dna在濃度較高的氯化鈉溶液中的溶解度很高,na+與帶負電的dna結合成dna鈉鹽。
這時dna在溶液中呈溶解狀態。
3.dna的析出與獲取 利用dna在濃度較低的氯化鈉溶液中溶解度小的原理,向含有dna的濃度較高的氯化鈉溶液中加入大量(300 ml )蒸餾水,稀釋氯化鈉溶液,使dna的溶解度下降,而蛋白質的溶解度增高(這就是蛋白質的鹽溶現象),從而使二者分離。這時,加上不停地攪拌,溶解度下降的dna逐漸呈絲狀物。
再通過過濾,濾去蛋白質,就可以獲取dna的黏稠物了。如果採用離心法則更好,用4 000 r/min 的旋轉頻率,離心15 min ,除去上清液(含有蛋白質),留下的沉澱物中含dna。
4.dna的再溶解 再用較高濃度的氯化鈉溶液去溶解dna黏稠物。
5.dna的沉澱和濃縮 除去了蛋白質的核酸溶液,必須再進一步沉澱和濃縮。最常用的方法是酒精沉澱法。
就是將含有na+的dna溶液,加入到相當於其兩倍體積的體積分數為95%冷酒精溶液中,混勻以後可以使dna沉澱、濃縮,形成含雜質較少的dna絲狀物,懸浮於溶液中。如果出現的絲狀物較少,可以將此混合液再放入冰箱中冷卻幾分。濃縮後的dna絲狀物,可以用緩緩旋轉玻璃棒的方法捲起(因為玻璃棒有吸附dna的作用)。
6.dna的鑑定 本實驗中鑑定dna的方法為二苯胺法(配方見下述的「藥品配製」)。二苯胺法的原理是:
dna中嘌呤核苷酸上的脫氧核糖遇酸生成ω-羥基-γ酮基戊醛,它再和二苯胺作用而顯現藍色(溶液呈淺藍色)。
鑑定時溶液藍色的深淺,與溶液中dna含量的多少有關。
二苯胺試劑的配製
a液： 15 g二苯胺溶於100 ml 冰醋酸中,再加15 ml濃硫酸,用棕色瓶儲存。如冰醋酸呈結晶狀態,則需加溫後待其熔化,再使用。
b液： 乙醛的體積分數為0.2%的溶液。
配製： 將0.1 ml b液加入到10 ml a液中,現配現用。
dna粗提取與鑑定的另一種方法
1.材料用具
新鮮菜花(或蒜黃、菠菜)。
塑料燒杯,量筒,玻璃棒,尼龍紗布,陶瓷研缽,試管,試管架,試管夾,漏斗,酒精燈,石棉網,三角架,火柴,刀片,天平。
研磨液,體積分數為95%的酒精溶液,二苯胺試劑,蒸餾水。
2.方法步驟
(1)dna的粗提取
①準備材料 將新鮮菜花和體積分數為95%的酒精溶液放入冰箱冷凍室,至少24 h。
②取材 稱取30 g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨 將碎菜花放入研缽中,倒入10 ml研磨液,充分研磨10 min 。
④過濾 在漏斗中墊上尼龍紗布,將菜花研磨液濾入燒杯中(有條件的學校可將濾液倒入塑料離心管中進行離心,用1 000r/min的旋轉頻率,離心25 min,取上清液放入燒杯中)。在4 ℃冰箱中放置幾分後,再取上清液。
⑤加冷酒精 將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分數為95%的冷酒精溶液中,並用玻璃棒緩緩地輕輕攪拌溶液(玻璃棒不要直插燒杯底部)。沉澱35 min後,可見白色的dna絮狀物出現。用玻璃棒緩緩旋轉,絮狀物會纏在玻璃棒上。
(2)dna的鑑定
①配製二苯胺試劑 取0.1 ml b液,滴入到10 ml a液中,混勻。
②鑑定 取4 ml dna提取液放入試管中,加入4 ml 二苯胺試劑,混勻後觀察溶液顏色(不變藍)。用沸水浴(100 ℃)加熱10 min 。在加熱過程中,隨時注意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現淺藍色)。
研磨液的配製方法
tris：10.1 g(相對分子質量為121.14),先加50 ml 蒸餾水溶解,用物質的量濃度為2 mol/l 的鹽酸調至ph8.0,再加下述藥品。
nacl：8.76 g(相對分子質量58.44)
edta：37.2 g(相對分子質量372.24)
sds：20 g(相對分子質量288.3)
待上述藥品全部溶解後,再用蒸餾水定容至1 000 ml。
若在室溫低於20 ℃時配製藥液,sds呈沉澱析出,此時需要加溫,才能將sds溶解。如果提前配製的研磨液出現了沉澱,則應加溫使沉澱溶解後再使用。
研磨液中幾種藥品的作用
sds(十二烷基磺酸鈉):可使蛋白質變性,與dna分離。
edta(乙二胺四乙酸二鈉):為dna酶的抑制劑,可以防止細胞破碎後dna酶降解dna。
物質的量濃度為0.15 mol/l的氯化鈉溶液：能很好地溶解dna。
tris/hcl：提供緩衝體系,dna在這個緩衝體系中呈穩定狀態。(tris為三羥甲基氨基甲烷)
鑑定dna的其他方法 用紫外燈照射法鑑定dna效果很好。具體鑑定方法如下。
1.配製染色劑。用蒸餾水配製萬分之五的溴化乙錠(eb)溶液。
2.將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹於蠟紙上,再滴1滴eb溶液染色。
3.將蠟紙放在紫外燈(260 nm)下照射(暗室中),可見橙紅色的螢光(dna的紫外吸收高峰在280 nm處)。
3樓：教育科學站
實驗21dna的粗提取
4樓：飛雪之靈
粗提取dna的不同方法及其原理
dna的粗提取原理是什麼
5樓：訾錕慈樂童
答案：解析：答案：
粗提取dna的原理是：dna溶於nacl溶液但在不同濃度的nacl溶液中dna溶解度不同。 純化粗提取dna的原理是：
dna不溶於冷酒精，但細胞中某些物質溶於酒精溶液。
關於生物dna的粗提取和鑑定，實驗步驟中，為什麼玻璃棒都是沿一個方向攪拌？有什麼目的嗎？
6樓：奧力奧
生物dna的粗提取和鑑定，實驗步驟中，玻璃棒都是沿一個方向攪的目的是：防止絲狀dna破碎，可以完整的纏在玻璃棒上。
dna的粗提取與鑑定實驗第一步驟加入蒸餾水的目的和第三步驟加入蒸餾水的目的
7樓：匿名使用者
第一步加蒸餾水是為了促進血細胞破裂，使dna從細胞核中釋放出來。第三部加蒸餾水降低nacl溶液濃度，使dna析出。關鍵要理解實驗原理。
對「DNA的粗提取和鑑定」實驗的敘述，正確的是A利
a 由於dna不溶於酒精，而其它雜質如蛋白質可以溶於酒精，因此利用體積專分數為95 的酒屬精溶液將dna和蛋白質分離，a錯誤 b 高溫能使蛋白質變性，也能使dna變性，只是dna對高溫的耐受性強於蛋白質，b錯誤 c 由於dna在o.14mol l的氯化鈉溶液中溶解度最低，因此在溶有dna的2mol ...
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用洋蔥為材料的dna粗提取後用二苯胺試劑檢測沸水浴後看不到實驗現象
a 加入洗滌劑bai 後，動du作要輕緩 柔和，zhi否則容易產生大dao量的泡沫，不利於後續步內驟地操作容，故a錯誤 b 利用蛋白酶分解雜質蛋白，從而使提取的dna與蛋白質分開，起到純化的作用，故b正確 c 加入酒精和用玻璃棒攪拌時，動作要輕緩，以免dna分子 下列關於生物學實驗的描述錯誤的是 a...