1樓:匿名使用者
設計特異性極高的引物是關鍵
用於反轉錄的rna質量也是很重要的一方面。
熒光定量pcr檢測的靈敏度怎麼確定
2樓:此時情緒
靈敏度即最低檢測限,如果你定了某個濃度為最低檢測濃度,那麼將其重複20次實驗,至少有17次以上應該陽性的。靈敏度的定義是:能夠與零相區分的最小檢測濃度。
什麼是實時熒光定量pcr?有什麼作用?請詳細說明。
3樓:月光_傾城
好多生物工作做廣告做培訓噢。你怎麼不去看一下。
實時定量pcr基本原理如何?
4樓:匿名使用者
實時pcr(real—time polymerase chain reaction)又稱熒光定量pcr或taqman pcr,是美國pe公司(perkin elmer)於2023年研製出的一種新的核酸定量技術。該技術在常規pcr基礎上運用熒光能量傳遞(fluorescence resonance energy transfer,fret)技術,加入熒游標記探針,巧妙地把核算擴增、雜交、光譜分析和實時檢測技術結合在一起,藉助於熒光訊號來檢測pcr產物。一方面提高了靈敏度,另一方面還可以做到pcr每迴圈一次就收集一個資料,建立實時擴增曲線,準確地確定ct值,從而根據ct值確定起始dna的拷貝數,做到真正意義上的dna定量。
另外由於ct值是一個完全客觀的引數,ct值越小,模版dna的起始拷貝數越小。因此,利用ct值確定dna拷貝數實時pcr方法比普通終點定量方法更加準確。
恆溫pcr和實時熒光定量pcr這兩種有什麼區別?哪個更有優勢?
5樓:最純粹的自由
實時熒光定量pcr技術,是指在pcr反應體系中加入熒光基團,利用熒光訊號積累實時監測整個pcr程序,最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
pcr(聚合酶鏈式反應)是利用dna在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°c左右)時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合,再調溫度至dna聚合酶最適反應溫度(72°c左右),dna聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。
恆溫pcr和實時熒光定量pcr的不同,是不同在實時熒光定量pcr的系統中加入了熒光染料(sybr green 或taqman 探針等等)。以sybr green為例,這種染料可以結合在雙鏈的dna上,當pcr不斷進行時,每一次退火生成的雙鏈dna也在增加,熒光染料結合也越多,熒光也越強。在機器中有一個探測熒光的探頭,可以定量檢測熒光的強度,轉換成數值。
這樣就可以實時記錄反映體系中dna的反應情況。
熒光pcr更有優勢,因為熒光pcr靈敏度高於恆溫pcr,同樣**也高一些。
6樓:傅浩川
恆溫pcr主要是,確定是否存在一段特異的dna序列。
但是熒光定量pcr是看溶液中特異的pcr序列的濃度。
兩者沒有什麼優勢。一般的可能就是功能簡單但是便宜。主要是便宜熒光的很貴 很貴 不是一般的貴!!
實時熒光pcr方法靈敏度略高於恆溫pcr,但儀器昂貴,試劑消耗也相對更貴,適合向高階客戶推廣;恆溫pcr大部分效能與實時熒光pcr相對,靈敏度稍低於實時熒光pcr,但儀器價效比高,更利於推廣。實際推廣中對高階客戶可以採取用恆溫pcr作為契機,在交流中如客戶對靈敏度有高要求而又有一定實力的可推薦使用實時熒光pcr產品。
7樓:匿名使用者
實時熒光pcr方法靈敏度略高於恆溫pcr,但儀器昂貴,試劑消耗也相對更貴,適合向高階客戶推廣;恆溫pcr大部分效能與實時熒光pcr相對,靈敏度稍低於實時熒光pcr,但儀器價效比高,更利於推廣。實際推廣中對高階客戶可以採取用恆溫pcr作為契機,在交流中如客戶對靈敏度有高要求而又有一定實力的可推薦使用實時熒光pcr產品。
pcr和實時熒光定量pcr這兩種有什麼區別
8樓:匿名使用者
實時熒光定量pcr技術,是指在pcr反應體系中加入熒光基團,利用熒光訊號積累實時監測整個pcr程序,最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
pcr(聚合酶鏈式反應)是利用dna在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°c左右)時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合,再調溫度至dna聚合酶最適反應溫度(72°c左右),dna聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。
恆溫pcr和實時熒光定量pcr的不同,是不同在實時熒光定量pcr的系統中加入了熒光染料(sybr green 或taqman 探針等等)。以sybr green為例,這種染料可以結合在雙鏈的dna上,當pcr不斷進行時,每一次退火生成的雙鏈dna也在增加,熒光染料結合也越多,熒光也越強。在機器中有一個探測熒光的探頭,可以定量檢測熒光的強度,轉換成數值。
這樣就可以實時記錄反映體系中dna的反應情況。
熒光pcr更有優勢,因為熒光pcr靈敏度高於恆溫pcr,同樣**也高一些。
熒光定量PCR報告單怎麼看，如何看熒光定量PCR檢驗報告單
ct dna檢測結果 copies ml 6.06乘以10的8次方 是指在你那取的樣本檢測出6.06乘以版10的8次方個拷貝每毫升的權衣原體濃度 uu dna 檢測結果 copies ml 9.55乘以10的5次方 是指在你那取的樣本檢測出9.55乘以10的5次方個拷貝每毫升的支原體濃度 而檢測下限...
熒光定量pcr儀器有哪些優缺點,熒光定量PCR儀器有哪些優缺點
最好都有。普通的基因擴增儀 pcr儀 只能夠定性地分析是否存在目標片段。但是 要低 版很多,而權且執行成本也要低很多。不過不能直接得到擴增結果,還需要做電泳檢測。實際中檢測遺傳疾病,品種分子標記篩選,甚至親自鑑定等都可以由普通pcr儀完成。但是,某些需要定量的實驗就必須用到實時定量pcr了。比如檢測...
如何設計熒光定量pcr的引物及taqman探針
用專門的試劑盒來做吧，然後按照說明書操作，挺方便的。我們實驗室以前用的biog熒光定量pcr試劑盒，反應挺靈敏的，實驗結果也不錯，而且染料法和探針法都有。可以用引物設計軟體，primer5就挺不錯的。你是要檢測dna還是rna？探針法檢測dna的話可以用biog super probe kit，檢測...