1樓：匿名使用者
目的基因熒光達到閾值時的迴圈數～ct值越低代表起始模板數量越大～
實時熒光定量pcr資料如何統計？
實時熒光定量pcr的結果該怎樣分析？
2樓：群英鬥將
1、如果有標準曲線，按照標準曲線計算；
2、一般都是相對量，則用delta delta ct方法來計算；
3、引物或探針降解：可通過page電泳檢測其完整性；
4、模板量不足：對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的最高濃度做起；
5、看ct值是分析熒光定量pcr最直觀的一個資料，ct值一般在35左右就失去參考價值了，平時我們實驗室用biodai-pcr熒光定量法測得的擴增曲線的起跳值基本在30左右。
擴充套件資料：
pvr的迴圈引數：
1、預變性；
模板dna完全變性與pcr酶的完全啟用對pcr能否成功至關重要，加熱時間參考試劑說明書。
2、變性步驟；
迴圈中一般95℃，30秒足以使各種靶dna序列完全變性，可能的情況下可縮短該步驟時間。變性時間過長損害酶活性，過短靶序列變性不徹底，易造成擴增失敗。
3、引物退火；
退火溫度需要從多方面去決定，一般根據引物的tm值為參考，根據擴增的長度適當下調作為退火溫度。然後在此次實驗基礎上做出預估。退火溫度對pcr的特異性有較大影響。
4、引物延伸；
引物延伸一般在72℃進行（taq酶最適溫度）。但在擴增長度較短且退火溫度較高時，本步驟可省略延伸時間隨擴增片段長短而定，一般推薦在1000bp以上，含pfu及其衍生物的衍生設定為1min/kbp。
5、迴圈數；
大多數pcr含25-35迴圈，過多易產生非特異擴增。
6、最後延伸；
在最後一個迴圈後，反應在72℃維持10-30分鐘．使引物延伸完全，並使單鏈產物退火成雙鏈。
3樓：南京金益柏生物科技****
用2-△△ ct法算的話，應如何算？ 假設檢測a基因，ct分別為（這裡記住ct越大，表明相對含量越低） 普通組/test1：28 實驗組1/test2：
29 實驗組2/test3：30 這時候要設對照了，假設test1為對照組（普通組），當然是以普通組為對照 那麼，相對含量為。
4樓：匿名使用者
看ct值、起始拷貝數、標準偏差等
如果是sybr做的話，再看下溶解曲線
實時定量pcr的結果分析
5樓：匿名使用者
sybergreen可以和所有核酸結合，沒有特異性。所以要保證特異性的話，最好用其他的方法。擴增體系中加入模板dna的體積，比如同時10微升的體系，對照組加1微升dna，實驗組加2微升dna，則實驗組的加樣量是對照組的2倍。
看ct值是分析熒光定量pcr最直觀的一個資料，ct值一般在35左右就失去參考價值了，平時我們實驗室用biodai-pcr熒光定量法測得的擴增曲線的起跳值基本在30左右
6樓：藣軙粡膽覓掖付
如果有標準曲線，按照標準曲線計算。一般都是相對量。則用delta delta ct方法來計算。
舉例如下：對照組基因a的ct值為20， 內參（比如βactin)ct值15。實驗組基因a ct值18，內參ct值14。
首先算加樣量：delta ct=15-14=1。2的1次方是2。
也就是說實驗組的加樣量是對照組的2倍。基因a: delta ct=20-18=2。
2的2次方是4。也就是說基因a的量在實驗組是對照組的4倍。但是由於加樣量是2倍，所以4處以2=2，最後的相對量是2倍。
幾點注意： 1。必須確定擴增的特異性 2。
只有相同目標的ct值才能相減（擴增效率有可能不同） 3。 2的某次方只是理論值，實際擴增效率低於2。 4。
最好不用syber green
7樓：邶忠茹胭
pcr是聚合酶鏈式反應,通過反覆的變性退火延伸,達到將微量dna擴增檢測的目的。目前實驗室裡多采用的是實時熒光定量檢測,一起可以讀取每次迴圈的熒光強度,並記錄達到設定的閾值的迴圈次數。原始標本含有的dna量愈多,達到閾值迴圈數愈小。
通過已知濃度的標準品為對照,定量分析樣本所含的目的dna量。
熒光定量pcr檢測時的ct值怎麼確定的
8樓：為青生物
找個教程看看。
先設定基線，機器會自動設定，這個一般不用改。
然後設定閾值，閾值設定的不同，ct值會相差比較大
做熒光定量pcr時，△△ct值是什麼意思，它的計算公式是什麼
9樓：北京索萊寶科技****
△△ct = △ct(試驗樣品) — △ct(基準樣品)△ct(試驗樣品) = ct（試驗樣品,目的基因） — ct（試驗樣品,內參基因）
△ct(基準樣品) = ct（基準樣品,目的基因） — ct（基準樣品,內參基因）
2 －△△ct =2 －（－1.2）= 2.30
熒光定量pcr檢測時的ct值怎麼確定的
10樓：匿名使用者
儀器配套軟體會直接給出來一個ct值，也可自己調節
11樓：匿名使用者
高於背景熒光強度的值被確定為閾值。
ct值： c代表cycle，t代表閾值(threshold)，ct值的含義是：每個反迴應管答內的熒光訊號到達設定的閾值時所經歷的迴圈數。
控制在擴增曲線的指數增長階段範圍之內。閾值線與擴增曲線的交叉點確定 ct 值。具體見附圖。
12樓：匿名使用者
根據你初始設定的閾值最後由機器確定的
求助關於熒光定量pcr的ct值問題
13樓：林顧姝
如果有標準曲線，按照標準曲線計算。
一般都是相對量。則用delta delta ct方法來計算。舉例如下：
對照組基因a的ct值為20， 內參（比如βactin)ct值15。實驗組基因a ct值18，內參ct值14。
首先算加樣量：delta ct=15-14=1。2的1次方是2。也就是說實驗組的加樣量是對照組的2倍。
基因a: delta ct=20-18=2。2的2次方是4。也就是說基因a的量在實驗組是對照組的4倍。但是由於加樣量是2倍，所以4處以2=2，最後的相對量是2倍。
幾點注意：
1。必須確定擴增的特異性
2。 只有相同目標的ct值才能相減（擴增效率有可能不同）
3。 2的某次方只是理論值，實際擴增效率低於2。
4。 最好不用syber green
14樓：琦桂花富羅
看了你空間裡的溶解曲線，你可以看到溶解峰的溫度都很低，全在80以下，你擴出來的東西多半隻是引物，你跑定量的時候有做ntc的孔嗎，如果有做，可以對照ntc組和加了模板的組，溶解峰還是一樣的話，那你擴出來的產物100%是引物了。
再有，你的擴增曲線問題，ct太了，一般做定量認為ct=25時，是一個模板擴出來的，所以當大於25擴出來的結果都不可信。
還有，你反轉錄的時候rna加多少，2微克？，反轉錄體系是多少,20微升？反轉錄之後按照多少比例稀釋，1比4？
總之，問題可以再問詳細一點，也可以直接hi我
如果做過ntc那溶解峰就沒問題了，而且都很單一，特異性蠻好的。沒稀釋的cdna做的定量，ct大於30？你p的什麼基因呢，表達量也太低了吧，內參的ct呢，也是這麼低嗎
熒光定量pcr檢測時的ct值怎麼確定的
找個教程看看。先設定基線,機器會自動設定,這個一般不用改。然後設定閾值,閾值設定的不同,ct值會相差比較大 熒光定量pcr檢測時的ct值怎麼確定的 儀器配套軟體會直接給出來一個ct值,也可自己調節 高於背景熒光強度的值被確定為閾值。ct值 c代表cycle,t代表閾值 threshold ct值的含...
實時熒光定量pcr因子表達量越少ct值越小嗎
所謂ct值,就是最先出 現超過閾值訊號的那個迴圈數。或者說是到了第幾個迴圈專才出現超過閾值的訊號。屬 c代表的是cycle,迴圈數目,t代表的是threshold,閾值。所以表達量越少的話,需要越多的迴圈才能擴增出來。也就是ct值越高 表達量越高ct值越小,成反比。pcr ct值越高是否說明表達越低...
用熒光定量pcr的方法進行相對定量其結果的穩定性，可信度如何
定量pcr最好每個樣本有三個重複，每次試驗做三遍比較可靠。因為比較靈敏，有微小差異會影響很大。並且記得檢查每個孔是否有誤差很大的數值，如果有誤差很大的孔建議刪掉這個結果，可能是膜沒有密封好 rt pcr每個樣品做3個平行樣最好 其實2個也可 平行樣之間迴圈數相差在0.2之內較為可靠。結果內中有一個圖...