熒光定量pcrct值很高,都是30幾,怎麼辦

1樓:我真不知道為什

看了copy你空間裡的溶解曲線,你可以看到溶解峰的溫度都很低,全在80以下,你擴出來的東西多半隻是引物,你跑定量的時候有做ntc的孔嗎,如果有做,可以對照ntc組和加了模板的組,溶解峰還是一樣的話,那你擴出來的產物100%是引物了。再有,你的擴增。

熒光定量pcrct值每次重複相差多少

2樓:

如果有標準曲線,按照標準曲線計算。

一般都是相對量。則用delta delta ct方法來計算。舉例如下:

對照組基因a的ct值為20, 內參(比如βactin)ct值15。實驗組基因a ct值18,內參ct值14。首先算加樣量:

delta ct=15-14=1。2的1次方是2。也就是說。。

做熒光定量pcr時,△△ct值是什麼意思,它的計算公式是什麼

3樓:北京索萊寶科技****

△△ct = △ct(試驗樣品) — △ct(基準樣品)△ct(試驗樣品) = ct(試驗樣品,目的基因) — ct(試驗樣品,內參基因)

△ct(基準樣品) = ct(基準樣品,目的基因) — ct(基準樣品,內參基因)

2 -△△ct =2 -(-1.2)= 2.30

定量pcr目的基因擴增曲線不好但是ct值很高怎麼回事

4樓:南京金益柏生物科技****

你反轉bai錄後的cdna的濃度測了沒有?

du完zhi全可以增加模板dao量,體系中的水全部內用模板替代。容提取rna時候注意在冰上進行免得降解現在血清裡內參好像沒統一標準,我用gapdh,β-actin效果都不太好;

另外,我做的血清提rna,濃度不高,最後跑出來ct值最小的也在30以上。

熒光定量pcr中關於閾值的設定是否會影響ct值?

5樓:匿名使用者

閾值和基線的設定肯定會影響ct值,你可以採用每次反應完後軟體自己選定的閾值。你也可以手動調整,但是如果你是相同的模板,做不同反應,那你必須使兩次實驗的閾值和基線調到相同。使用相同的標準品,才能減小不同批次反應的誤差。

6樓:

閾值和基線的設定是會影響ct值的,一般儀器會自動對基線和閾值進行優化,一般選用儀器上的設定就可以了。

但有些時候也需要調整,主要根據標準曲線上的斜率,擴增效率和r2值進行調整,將斜率調到合適的位置即可。

當然也可以在每次進行實驗時設定1-2個內參,根據內參調整引數。

實時熒光定量pcr因子表達量越少ct值越小嗎

7樓:匿名使用者

所謂ct值,就是最先出

現超過閾值訊號的那個迴圈數。或者說是到了第幾個迴圈專才出現超過閾值的訊號。屬

c代表的是cycle,迴圈數目,t代表的是threshold,閾值。

所以表達量越少的話,需要越多的迴圈才能擴增出來。也就是ct值越高

8樓:匿名使用者

表達量越高ct值越小,成反比。

熒光定量pcr三步法反應條件怎麼設定

9樓:匿名使用者

三步法pcr 首先95°c 作用3 min。 pcr 進行 35 個迴圈。步驟溫度變性 95°c 退火 58°c 延伸 72°c 時間 30 秒 30 秒 30 秒融解曲線溫度時間變溫速度 95°c 0秒 20°c/秒 55°c 15 秒 20°c/秒 95°c 0秒 0.

1°c/秒 pcr 疑難解答當 pcr 結果不甚滿意時,首先檢查以下幾方面並遵照執行: 1 將 pcr 反應的試管與反應板緊貼。 2 當酶反應混合物以 70°C「熱啟動」開始迴圈時,切記在加入酶後稍 3 微振盪一下,因為在 0.

2-ml 的 pcr 管中不能均勻傳熱。 4 不要隨意減少 dntp 的用量, 它是一個系統的因素, 必須與其它成份保持平衡。