1樓:華重樓
我們做過這個實驗,我給你說點具體的(大腸桿菌為例):
1 配置培養基,就是牛肉膏蛋白腖培養基,要液體的。
2 按一定量分裝到試管裡(需要13*3支,3支一組),滅菌。
3 冷卻後取大腸桿菌懸液,用移液槍分別接種到試管培養基中4 把12組放入37度搖床培養,取一組馬上測od值,三個值取平均數,偏差太大者捨去
5 在2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小時後分別測其他組。如果無法在特定時間測,也要在那一時間將該組在搖床取出冷凍儲存,能測時取出測量即可
6 將得到的值換算後畫圖即可
我做過了不是很難,資料比較**,但圖作出來還是有正確的走勢的,是個時期都能顯示出來
2樓:匿名使用者
細菌生長曲線的測定
一、目的要求
瞭解細菌生長曲線的特點及測定的原理
學習用比濁法測定大腸桿菌的生長曲線
二、基本原理
少量的細菌,接種到一定體積的、合適的新鮮液體培養基中,在適宜的條件下進行培養,定時測定培養液中的菌量,以菌量的對數作縱座標、生長時間作橫座標,繪製的曲線為生長曲線。一般生長曲線可分為延遲期、對數期、穩定期和衰亡期(圖8-4-1),生長曲線是微生物在一定環境條件下於液體培養時所表現出的群體生長規律。不同的微生物其生長曲線不同,即使是同一種微生物,在不同的培養條件其生長曲線也不同,測定在一定條件下培養的微生物的生長曲線。
在科學研究及生產上是非常有意義的。
大腸桿菌是微生物學教學和科研常用菌種,也是某些生物製品的生產菌種,常需要了解在一定條件下其生長曲線的特徵。測定微生物的數量如本章實驗1-3所介紹有多種不同的方法,可以根據要求和實驗室的條件選用。本實驗用光電比色計進行比濁,測定od值的方法、此法所需儀器不多,操作簡便、迅速。
三、實驗材料
(一)儀器
光電比色計、試管、錐形瓶、移液管
(二)培養基和菌種
肉膏蛋白腖培養液、大腸桿菌菌種
四、實驗內容
(1)預先將大腸桿菌接種到肉膏蛋白腖培養液中,37℃振盪培養18h備用。
(2)把光電比色計的波長調至420 nm,開機預熱10-15min。
(3)以未接種的肉膏蛋白腖培養液校正比色計的零點(以後每次測定都要重新校正零點)。
(4)取盛有150 ml無菌肉膏蛋白腖培養液的500 ml錐形瓶6個,分為兩組,分別編號為1、2、3號和4、5、6號。各瓶加入培養18h的大腸桿菌培養液10 ml,37℃下振盪培養。
(5)於接種後的第0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20 h,分別用無菌移液管從各瓶中吸取培養液5ml,在光電比色計上測定od420值。若菌液太濃時,作適當稀釋,使od420值在0.0-0.
4之間較好。經稀釋後測得od420值要乘以稀釋倍數,才是培養液實際的od420值。
(6)於培養第8h取樣測定後,向其中一組(1-3號)每瓶加入肉膏腖培養液的5倍濃縮液10 ml作補料;另一組(4-6號)每瓶加入10 ml無菌水。繼續振盪培養和定時測定。
怎樣od600測菌體生長曲線? 5
3樓:匿名使用者
這位同仁真的好細心,我就沒想過這麼多,呵呵。
我們一直都是稀釋後測的。內我們做的是大腸容桿菌比較多,酵母也有。
對於起始值我們是以空白培養基來清零的。
我們用的是可見分光光度計,600和660都有,但都要求讀數在0.3到0.7之間。
超過0.7的當然就要稀釋咯,我們是使用蒸餾水稀釋,並且馬上讀數的。
4樓:卞壯海流如
我們bai
做過這個實驗,我給du你說點具體的(大腸桿菌為例zhi):
1配置培養基dao,就是版牛肉膏蛋白腖培養基,要液體權的。
2按一定量分裝到試管裡(需要13*3支,3支一組),滅菌。
3冷卻後取大腸桿菌懸液,用移液槍分別接種到試管培養基中4把12組放入37度搖床培養,取一組馬上測od值,三個值取平均數,偏差太大者捨去
5在2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小時後分別測其他組。如果無法在特定時間測,也要在那一時間將該組在搖床取出冷凍儲存,能測時取出測量即可
6將得到的值換算後畫圖即可
我做過了不是很難,資料比較**,但圖作出來還是有正確的走勢的,是個時期都能顯示出來
怎樣測細菌的生長曲線
5樓:du知道君
用od值必須注意,只有透光率在20%~80%之間,濃度與od值的關係才是呈線形的。2、由於用比濁法不能分辨死菌活菌,所以要防止在生長後期死菌與活菌相混合導致od值假增高,我們採用的方法是:第一次測定生長曲線的時候,在測定od值的時候,同時採用臺盼藍染色法作活細胞計數,從而得到一個修正資料。
以後在發酵時就可以只測od值來監測生長狀況了。另外,也有人採用同時接種平板的方法得到修正值的,我覺得太麻煩花時間的說。
生長曲線怎麼測定?
6樓:匿名使用者
一:細菌生長曲線的測定
1 目的
1.1 瞭解細菌生長曲線特點及測定原理
1.2 學習用比濁法測定細菌的生長曲線
2 原理
將少量細菌接種到一定體積的、適合的新鮮培養基中,在適宜的條件下進行培養,定時測定培養液中的菌量,以菌量的對數作縱座標,生長時間作橫座標,繪製的曲線叫生長曲線。它反映了單細胞微生物在一定環境條件下於液體培養時所表現出的群體生長規律。依據其生長速率的不同,一般可把生長曲線分為延緩期、對數期、穩定期和衰亡期。
這四個時期的長短因菌種的遺傳性、接種量和培養條件的不同而有所改變。因此通過測定微生物的生長曲線,可瞭解各菌的生長規律,對於科研和生產都具有重要的指導意義。
測定微生物的數量有多種不同的方法,可根據要求和材料
3.1菌種
大腸桿菌
3.2培養基
肉膏蛋白腖培養基
3.3 儀器和器具
721分光光度計,比色杯,恆溫搖床,無菌吸管,試管,三角瓶。
4 流程
種子液→標記→接種→培養→測定
5 方法
5.1種子液製備
取大腸桿菌斜面菌種1支,以無菌操作挑取1環菌苔,接入肉膏蛋白腖培養液中,靜止培養18h作種子培養液。
5.2標記編號
取盛有50ml無菌肉膏蛋白腖培養液的250ml三角瓶11個,分別編號為0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。
5.3接種培養
用2ml無菌吸管分別準確吸取2ml種子液加入已編號的11個三角瓶中,於37℃下振盪培養。然後分別按對應時間將三角瓶取出,立即放冰箱中貯存,待培養結束時一同測定od值。
5.4生長量測定
將未接種的肉膏蛋白腖培養基傾倒入比色杯中,選用600nm波長分光光度計上調節零點,作為空白對照,並對不同時間培養液從0h起依次進行測定,對濃度大的菌懸液用未接種的牛肉膏蛋白腖液體培養基適當稀釋後測定,使其od值在0.10.~0.
65以內,經稀釋後測得的od值要乘以稀釋倍數,才是培養液實際的od值。
6 結果
6.1 將測定的od值填入下表:
時 間(h) 對照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20
光密度值(od600)
6.2 以上述**中的時間為橫座標,od600 值為縱座標,繪製大腸桿菌的生長曲線。
問答題 細菌生長曲線分為哪幾個時期?各有何特點
7樓:墨滅故事
遲緩期、對數期、穩定期、衰亡期
遲緩期此期曲線平坦穩定,因為細菌繁殖極少。此期中細菌體積增大,代謝活躍,為細菌的**增殖合成、儲備充足的酶、能量及中間代謝產物。
對數期此期生長曲線上活菌數直線上升。細菌以穩定的幾何級數極快增長,可持續幾小時至幾天不等。此期細菌形態、染色、生物活性都很典型,對外界環境因素的作用敏感。
穩定期該期的生長菌群總數處於平坦階段,但細菌群體活力變化較大。細菌繁殖速度漸趨下降,相對細菌死亡數開始逐漸增加,此期細菌增殖數與死亡數漸趨平衡。
衰亡期隨著穩定期發展,細菌繁殖越來越慢,死亡菌數明顯增多。此期細菌變長腫脹或畸形衰變,甚至菌體自溶,難以辨認其形。生理代謝活動趨於停滯。
擴充套件資料:
細菌生長曲線檢測方法
體積測量法:
通過測定一定體積培養液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。取一定量的待測培養液(如10毫升)放在有刻度的離心管中,設定一定的離心時間(如5分鐘)和轉速(如5000 rpm),離心後,倒出上清夜,測出上清夜體積為v,則菌絲濃度為(10-v)/10。
稱乾重法:
可用離心或過濾法測定。一般乾重為溼重的10-20%。在離心法中,將一定體積待測培養液倒入離心管中,設定一定的離心時間和轉速,進行離心,並用清水離心洗滌1-5次,進行乾燥。
乾燥可用烘箱在105 ℃或100℃下烘乾,或採用紅外線烘乾,也可在80℃或40℃下真空乾燥,乾燥後稱重。
比濁法:
微生物的生長引起培養物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定一定波長下的吸光值,判斷微生物的生長狀況。對某一培養物內的菌體生長作定時跟蹤時,可採用一種特製的有側臂的三角燒瓶。
將側臂插入光電比色計的比色座孔中,即可隨時測定其生長情況,而不必取菌液。
菌絲長度測量法:
對於絲狀真菌和一些放線菌,可以在培養基上測定一定時間內菌絲生長的長度,或是利用一隻一端開口並帶有刻度的細玻璃管,到入合適的培養基,臥放,在開口的一端接種微生物,一段時間後記錄其菌絲生長長度,藉此衡量絲狀微生物的生長。
8樓:一氧化氫氕氘氚
細菌是微生物,微生物的生長分為四個時期:
1 延滯期:又叫調整期,細菌代謝活躍,大量合成細胞**所需的酶類、atp以及其他細胞成分。
細胞往往不生長繁殖,其數目無明顯增加。為後面做準備,相當於適應新環境。
2 對生長數期:細菌代謝旺盛,個體的形態和生理特性比較穩定調整期和對數期的細菌幾乎不存在
種內鬥爭),開始迅速繁殖,由於細菌以**方式繁殖,細胞數目呈幾何級數增加。
3 穩定期:有害代謝產物積累,新增細胞數目與死亡細胞數目達到動態平衡,次級代謝產物大量積
累,形成芽孢(穩定期的細菌種內鬥爭最激烈),繁殖速率逐漸下降。
4 衰亡期:細菌數目急劇下降,出現畸形細菌(衰亡期的細菌和無機環境的鬥爭最激烈),營養耗
盡,大量死亡。
9樓:匿名使用者
細菌的生長繁殖的4個時期:
遲緩期,對數期,穩定期,衰亡期。
遲緩期(lag phase):又叫調整期。細菌接種至培養基後,對新環境有一個短暫適應過程(不適應者可因轉種而死亡)。
此期曲線平坦穩定,因為細菌繁殖極少。遲緩期長短因素種、接種菌量、菌齡以及營養物質等不同而異,一般為1~4小時。此期中細菌體積增大,代謝活躍,為細菌的**增殖合成、儲備充足的酶、能量及中間代謝產物。
對數期(logarithmic phase):又稱指數期。此期生長曲線上活菌數直線上升。
細菌以穩定的幾何級數極快增長,可持續幾小時至幾天不等(視培養條件及細菌代時而異)。此期細菌形態、染色、生物活性都很典型,對外界環境因素的作用敏感,因此研究細菌性狀以此期細菌最好。抗生素作用,對該時期的細菌效果最佳。
穩定期(stationary phase):該期的生長菌群總數處於平坦階段,但細菌群體活力變化較大。由於培養基中營養物質消耗、毒性產物(有機酸、h2o2等)積累ph下降等不利因素的影響,細菌繁殖速度漸趨下降,相對細菌死亡數開始逐漸增加,此期細菌增殖數與死亡數漸趨平衡。
細菌形態、染色、生物活性可出現改變,併產生相應的代謝產物如外毒素、內毒素、抗生素、以及芽胞等。
衰亡期(decline phase):隨著穩定期發展,細菌繁殖越來越慢,死亡菌數明顯增多。活菌數與培養時間呈反比關係,此期細菌變長腫脹或畸形衰變,甚至菌體自溶,難以辯認其形。
生理代謝活動趨於停滯。故陳舊培養物上難以鑑別細菌。
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