1樓：匿名使用者
用syber green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。反應結束後，逐漸加溫。和syber green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber green結合。
一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化！
開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的，接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。
如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。
誰能具體解釋一下熒光定量pcr中溶解曲線的意思以及作用
2樓：匿名使用者
溶解曲線是判斷擴增產物是否單一的曲線，顧名思義，其跟模板（或其濃度）沒有關係，擴增什麼基因就應該有其相對應的溶解曲線，類似於電泳。那麼你擴增幾種基因就應該有幾種對應的峰（一般sybr法的目的基因在80~90℃之間），我說的是一般情況，這個跟擴增片段長短有關係。出現其他峰就該考慮是否為引物二聚體（一般為60~75℃之間）視引物長度而定，而基因組dna汙染的峰會在90℃以後。
出現引物二聚體可能是引物設計、引物加量等原因（也有可能是從加完反應液到上機開始pcr這之間的時間過長）所致；基因組dna那麼考慮設計跨內含子引物或者實驗之前做gdna的消除工作。而陰性對照有目的峰那可能就是模板汙染，注意實驗操作等避免模板汙染。
詳細請見我的回答
3樓：表詠蒿樂蓉
用syber
green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。反應結束後，逐漸加溫。和syber
green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber
green結合。一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。
曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化！開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的，接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。
如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。
求助，熒光定量pcr擴增曲線和溶解曲線
4樓：抹不掉呀
實時pcr產物的tm值大小一般會在80deg;上下，所以溶解曲線不必從40deg;開始，可以從65deg;開始進行溶解曲線繪製，另外在產物之前出現的小峰，同時也在陰性對照中出現了，應該是引物二聚體或者是非特異的擴增。
5樓：真莉莉畢田
通過你的描述目前還有很多資訊不實很瞭解：目的片段長度？pcr反應條件？
管家基因的溶解曲線怎麼樣？做的什麼實驗？是否將產物跑了電泳，條帶怎麼樣？
你可以將上述問題整理一下在一些專業性較強的生物論壇發帖子讓其他大神幫你分析一下。比如丁香園、生物秀等等。
出現怪異的溶解曲線大部分都是機器設定或者反應體系的問題，建議：
1、將擴增產物跑一下電泳，看一下目的條帶亮不亮2、一般定量pcr擴增後目的片段的峰在80~90℃之間，反應條件確認一下設定是否有問題
3、適當增加模板量或者減少引物濃度。
4、用的是哪個公司的酶？問一下這個公司的技術支援
怎麼理解熒光定量pcr的溶解曲線
6樓：匿名使用者
熒光定量pcr的溶解曲線理解：用syber green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。應結束後，逐漸加溫。和syber
green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber
green結合。
一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化，開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的。
接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。
7樓：匿名使用者
這個一般是用syby green作為熒光染料的時候需要做的工作！
因為syby green染料是非特異的染料，只要有擴增，染料就可以鑲嵌在雙鏈中發出熒光。我們做溶解曲線是為了觀察我們擴增發出熒光的片段是不是我們需要的產物。如果溶解曲線做出來只有單峰，且出鋒位置是你的退火溫度，那麼這個是你的產物發出的熒光，實驗結果有效。
如果出現多鋒或退火溫度不對，那麼這個實驗結果是不可信的！你需要再次調整！
誰能具體解釋一下熒光定量pcr中溶解曲線的意思以及作用
8樓：匿名使用者
這個用於syber green實時pcr。而使用探針的不需要。
因為syber green是非特異性結合，所以如果有非特異性的序列被擴增，也會同樣產生訊號。在設計引物的時候，可以計算出被擴增序列的tm。pcr反應完成以後，開始進行解離曲線的測量。
一般是對反應產物逐步加溫，每增加一度，測訊號一次。pcr產物會在溫度達到tm時發生解離，熒光訊號會一下子消失、如果把溫度和熒光訊號的變化做一個圖，就會看到一開始，熒光訊號沒有變化，是一個平直的線。達到tm附近是，會有一個比較銳利的峰，說明訊號的變化很大，繼續加熱超過tm，這是雙鏈都開啟了。
所以訊號也不會再有變化，所以又是平直的線。
如果產物都是特異性的，就是我上面說的那樣。如果有非特異性產物，就會出現不在tm就出現峰值，或者有矮而胖的峰值等等異常情況出現，這樣，那個管子的樣本就不能用了。
實時熒光定量pcr，溶解曲線怎麼判斷是否為目的產物
9樓：南京金益柏生物科技****
根據曲線初步判斷，整個實驗設計還可以！你做相對定量嗎，將樣品結果與對照看看基因表達量分析就可以了！ 如果絕對定量，需要進一步實驗吧！
10樓：為青生物
溶解曲線的單峰明顯，橫座標在80度以上，一般就是pcr產物
sybr green pcr溶解曲線有何意義
11樓：壞蛋老公他媳婦
作用類似於電泳，但是相對於電泳更靈敏，更清晰一些。
通過溶解曲線可
以瞭解目的產物tm值，是否出現雜峰。一般溶解曲線的結果+電泳的結果和在一起相對比較準確。當然最後片段也可以測序最終確定目的產物。
主要的是：根據溶解曲線可以確定以下幾點：
a.擴增產物是否單一，即是否含有引物二聚體等其它非目的性產物。如果在90度左右的時候溶解曲線陡然下降，說明產物較純。
b.可以確定產物的tm值，一般在90度以上。
可能用途更多，最常用的主要的兩點就是這兩個了。
針對溶解曲線還有一條相應的曲線，看起來更方便一些。
dna溶解曲線表示擴增產物的特異性。
曲線橫座標是溫度，每個溫度點一個。一般從60到98度縱座標是熒光強度的變化值（不是強度本身）。一開始加熱的時候，雖然熒光強度比較強，但是由於雙鏈沒有解離，所以熒光強度保持不變。
當加熱接近於pcr產物tm時，雙鏈開始解離，熒光強度變小，機器會比較前後2個溫度點的熒光強度，然後把2者的差值標在圖上。tm到達時，有一般雙鏈解離，這時的熒光強度變化最大（峰值）。再加熱，雙鏈全部解離，所以熒光強度的變化又變小了。
pcr產物大小不一，但是只要有相同或者相近的tm，峰值就有可能在一個位置上。如果實際測得的峰值和理論計算的吻合，問題不大。如果有差別，說明有非特異性產物，不要再用sybr green方法。
請問：實時熒光定量pcr怎樣設定才能有溶解曲線？
12樓：匿名使用者
有一種可能是，在試驗開始的設定階段，需要為整個實驗設計出熔解曲線的程式，這個您可能忘記了。
13樓：匿名使用者
在設定反應程式時，在最後加一步
什麼是realtime-pcr溶解曲線
14樓：匿名使用者
如圖所示，這就是一個標準的real time-qpcr溶解曲線。下面從幾個方面來解讀：1、隨著溫度的升高，dna雙鏈斷裂；接著溫度降低，到達退火溫度的時候，dna雙鏈復性，熒光分子繫結在dna雙鏈上，所以熒光訊號值到達最高點。
上面的是反映在擴增曲線上面的。2、接著dna雙鏈分子由退火溫度約60度，繼續升溫，雙鏈斷開，dna分子溶解。請注意溶解曲線的縱座標，表示單位時間內熒光訊號的變化量。
當擴增產物特異，是單一產物的時候，這個縱座標峰值所對應的橫座標應該是一致的，即呈現單一的溶解峰，這個時候，在同樣的溫度下，可以認為是產物相同；如果溶解峰不單一，就意味有非特異性擴增。
誰能幫我解釋一下，誰能幫我解釋解釋一下
出自呂祖靈籤第四十五籤 籤文 天時人事 正是好佳期 好佳期 又恐蹺蹊但看雙入卯金宜 只待十八子一提攜 十八子即李 入卯金即劉 入或本作人 解曰 凡事勿忘其本 則可成就 到底都系吉祥之象卦象 有奇逢之喜 務宜見善勇為 佔之者 當知滿招損 謙受益之義 又曰 富貴由來未許求 羨君騎鶴上揚州 千般種作皆如意...
您好，我想問一下熒光定量PCR產物的溶解曲線的Tm值在92度可以嗎？是不是在86 88度之間最好？謝謝
這個不是絕對的，只是大多數rt pcr產物的tm值會落在那個範圍內，有些目的片段很長的產物有可能會稍微大一點。這跟目的片段長度有關係。主要看產物是否為單一峰，是否有雜峰。92度時，dna雙鏈都接近變性溫度了呀。tm值常在60 70度左右，可以通過熔接曲線看出來。您好，我想問一下熒光定量pcr產物的溶...
幫看一下乙肝病毒DNA熒光定量PCR檢測報告
你的檢查結果顯示hbv dna 2.1 10 3次方 2100個病毒含量，屬於陽性，但也是屬於輕微的，肝功能正 版常和b超也正常，說明權病毒不是很強，這種情況是不需要 也不需要用藥，定期檢查就可以了，放心吧！2.1 10 3 2.1 10 10 10 2100，大於1000.是陽性bai，低度復du...