1樓：匿名使用者
是的bai原核表達這是個很
du重要的問題 如果你的基因
zhiorf中存dao在稀有密碼子 會嚴重專影響表達 尤其是arg(agg,aga,cga);leu(cta);ile(ata);pro(ccc). 當然屬重複存在更增加了表達的難度。
如果你的稀有密碼子比例不是很大 可以用rosetta菌株試試 它補充了一定的大腸桿菌稀有密碼子
但是如果比例很大就不可以了 考慮自己合成基因好了我的片段就是 含40%稀有密碼子 檢測組蛋白有表達訊號 但是基因不表達
什麼是密碼子的偏愛性？在外源基因表達中有什麼應用
急用！一論述題:如何克隆一個功能性基因，如何在原核系統中高效表達？ 50
2樓：我和家人
這題目考查的就是基因工程的步驟，詳細敘述下基因工程的步驟即可。
提取目的基因：主要有兩條途徑：如果目的基因序列已知，則用限制性內切酶從供體細胞的dna中直接分離基因；如果序列未知，則人工合成基因。
直接分離基因最常用的方法是「鳥槍法」，用限制酶將供體細胞中的dna切成許多片段，將這些片段分別載入運載體，然後通過運載體分別轉入不同的受體細胞，讓供體細胞提供的dna（即外源dna）的所有片段分別在各個受體細胞中大量複製（在遺傳學中叫做擴增），從中找出含有目的基因的細胞，再用一定的方法把帶有目的基因的dn**段分離出來；人工合成基因的方法主要有兩條：一條途徑是以目的基因轉錄成的信使rna為模版，反轉錄成互補的單鏈dna，然後在酶的作用下合成雙鏈dna，從而獲得所需要的基因。另一條途徑是根據已知的蛋白質的氨基酸序列，推測出相應的信使rna序列，然後按照鹼基互補配對的原則，推測出它的基因的核苷酸序列，再通過化學方法，以單鏈核苷酸為原料合成目的基因。
目的基因與運載體結合：這是基因工程的核心，三種最常用的載體是細菌質粒、噬菌體和動植物病毒。如果以質粒作為運載體，首先要用一定的限制酶切割質粒，使質粒出現一個缺口，露出黏性末端。
然後用同一種限制酶切斷目的基因，使其產生相同的黏性末端。將切下的目的基因的片段插入質粒的切口處，首先鹼基互補配對結合，兩個黏性末端吻合在一起，鹼基之間形成氫鍵，再加入適量dna連線酶，催化兩條dna鏈之間形成磷酸二酯鍵，從而將相鄰的脫氧核糖核酸連線起來，形成一個重組dna分子。
將目的基因匯入受體細胞：基因工程中常用的受體細胞有大腸桿菌，枯草桿菌，土壤農桿菌，酵母菌和動植物細胞等。題目為原核系統，如受體細胞是細菌，一般是將細菌用氯化鈣處理，以增大細菌細胞壁的通透性，使含有目的基因的重組質粒進入受體細胞。
目的基因匯入受體細胞後，就可以隨著受體細胞的繁殖而複製，由於細菌的繁殖速度非常快，在很短的時間內就能夠獲得大量的目的基因。
目的基因的檢測和表達：目的基因匯入受體細胞後，是否可以穩定維持和表達其遺傳特性，只有通過檢測與鑑定才能知道。檢測的方法有很多種，例如，大腸桿菌的某種質粒具有青黴素抗性基因，當這種質粒與外源dna組合在一起形成重組質粒，並被轉入受體細胞後，就可以根據受體細胞是否具有青黴素抗性來判斷受體細胞是否獲得了目的基因。
重組dna分子進入受體細胞後，受體細胞必須表現出特定的性狀，才能說明目的基因完成了表達過程。
3樓：匿名使用者
脅下心功1大心心情心兩個義務幣種兩
密碼子偏好性分析 說明什麼問題
4樓：匿名使用者
核基因密碼子使用偏好性分析
赤芝(ganoderma lucidum)是一種具有悠久藥用歷史的藥用真菌，其主要活性成分靈芝三萜具有重要的藥用價值，為了實現靈芝三萜的體外高效異源合成，就要首先了解赤芝的密碼子使用特性，從而有針對性的提高關鍵酶基因在原核、真核表達系統中的表達量.通過密碼子使用偏好分析，我們發現赤芝基因組總gc含量為59.5％，密碼子第三位鹼基gc 含量為70.
6％，說明赤芝中偏好以gc 結尾的密碼子，以轉錄組資料為基礎的分析結果一致，表示在沒有基因組資料的情況下，轉錄組分析密碼子偏好性可行.通過計算，我們得到了赤芝中的22 個最優密碼子，與大腸桿菌、釀酒酵母的密碼子使用特性相比，大腸桿菌稀有密碼子在赤芝基因中出現的頻次較低，然後釀酒酵母稀有密碼子在赤芝基因中出現的頻次較高，顯示其對外源赤芝基因的表達會產生一定的影響.
5樓：cofe_飛
每一個物種都有其密碼子使用的偏好性，在這個物種使用頻率高的密碼子在另一個物種裡不一定高，如果兩個密碼子使用頻率差很大，那麼當這個外源基因插入到另一個物種中進行表達時（當然還要構建載體什麼的，不贅述），蛋白的表達量就很低。在進行蛋白表達時，一定要考慮宿主菌的密碼子偏好性，然後根據密碼子的偏好性進行密碼子的優化。
密碼子偏愛性是什麼？
6樓：匿名使用者
不同的生物，甚至同種生物不同的蛋白質編碼基因，對簡併密碼子使用頻率並不相同，具有一定的偏愛性，其決定因素是：生物基因組中的鹼基含量 在富含at的生物（如單鏈dna噬菌體fx174）基因組中，密碼子第三位上的u和a出現的頻率較高；而在gc 豐富的生物（如鏈黴菌）基因組中，第三位上含有g或c的簡併密碼子佔90%以上的絕對優勢。已知dnag和rpod（編碼rna聚合酶亞基）及rpsu（30s核糖體上的s21б蛋白）屬於大腸桿菌基因組上的同一個操縱子，而這3個基因產物在數量上卻大不相同，每個細胞內僅有dnag產物50拷貝，而rpod為2800拷貝，rpsu則高達40 000拷貝之多。
研究dnag序列發現其中含有不少稀有密碼子，也就是說這些密碼子在其他基因中利用頻率很低，而在dnag中卻很高。許多調控蛋白如laci、arac、trpr等在細胞內含量也很低，編碼這些蛋白的基因中密碼子的使用頻率和dnag相似，而明顯不同於非調節蛋白。高頻率使用這些密碼子的基因翻譯過程極容易受阻，影響了蛋白質合成的總量。
細胞內對應於稀有密碼子的trna較少，高頻率使用這些密碼子的基因翻譯過程容易受阻，影響了蛋白質合成的總量。
一道關於基因工程（干擾素在大腸桿菌中表達）的問題，跪求答案
7樓：月圓之夜一
①1、優化表達載體設計；
a、啟動轉錄起始的啟動子序列
b、決定mrna翻譯的sd序列的優化
2、提高稀有密碼子trna的表達作用；
如：pro、ccg、ccc、ccu和cca
3、提**擾素基因mrna的穩定性；
a、減少核酸外切酶可能對干擾素基因的切割作用
b、改變干擾素基因mrna的結構，使之不易被降解
4、提**擾素基因表達產物的穩定性；
a、使用蛋白水解酶缺陷宿主
b、分泌型載體
c、對外源蛋白中水解酶敏感序列修飾和改造
d、融合蛋白
5、優化發酵過程。
可以使用化學合成法，使用大腸桿菌偏愛密碼子編碼精氨酸（cgt）及其他氨基酸，避免對翻譯的干擾。合成後使用pcr擴增得到大量目的基因。
在化學合成過程中，使用短片段直接連線法。先將化學合成的一條寡核苷酸片段啟用，使其帶上5′-磷酸基因，然後再與另一條部分互補的寡核苷酸片段退火，形成帶有黏性末端的雙鏈寡核苷酸片段。 把這些雙鏈寡核苷酸片段混合在一個試管中，加上t4dna連線酶，使它們彼此連線組裝成一個完整的基因或基因的一個片段。
化學合成主要是可以任意製造、修飾基因，在基因兩端方便地設立各種接頭以及選擇各種宿主生物偏愛的密碼子。但合成的基因可能存在表達方面的困難，例如誤選了低頻率使用的密碼子或由於遺傳密碼的簡併性等原因；且**因素限制一時難以改變。
②1、pcr引物兩端設計突出的酶切位點；
在pcr引物兩端設計突出的酶切位點，使擴增產物兩端分別新增上ecori 、sali（如果配有載體的圖，選離得遠的兩個酶切位點）酶切位點，注意方向性，注意新增保護鹼基。
2、雙酶切後連線載體和目的基因；
a、pcr產物雙酶切**
b、載體同樣酶雙酶切**
c、混合後加入dna連線酶連線
d、連線後電泳**目的橋帶得到重組子
3、轉化；
製備大腸桿菌感受態細胞（氯化鈣誘導重組子轉化感受態細胞）
4、鑑定。
酶切鑑定篩選出陽性克隆
③以大腸桿菌為宿主菌高效表達外源基因時，形成包涵體．包涵體有利於防止蛋白酶對錶達蛋白的降解，並且也有利於分離表達產物，其水難溶性及密度遠大於其它細胞碎片和細胞成分。但包涵體形成後，表達蛋白不具生物活性。
**：收集菌體，懸於緩衝液中超聲破碎菌體，在適當的溶液中分級離心取沉澱即可得到包涵體；
洗滌沉澱後，層析可得到純化包涵體。
復性：尿素溶液使包涵體充分變性溶解，谷胱甘肽復性使蛋白摺疊成天然構象復性，其關鍵在於如何使二硫鍵正確配對。
④提取總蛋白
sds-聚丙烯醯胺凝膠電泳；
蛋白印跡：半乾法將蛋白條帶電轉印至pvdf膜上；
探針製備：以山羊抗hifn-α2b多克隆抗體作一抗，以hrp 標記的兔抗山羊igg作二抗；
雜交和檢測。
⑤在96孔板培養細胞，分別加入梯度稀釋的蛋白溶液培養，再加入病毒液攻擊，注意空白對照和活性對照，共培養一段時間後觀察細胞病變情況判斷蛋白生物學活性。
8樓：匿名使用者
1、精氨酸密碼子共有5種，存在密碼子偏愛特性，利用點突變使稀有精氨酸密碼子改變為大腸桿菌中高表達的密碼子。
2、定向克隆重組入載體(psti&hindiii雙酶切)。電擊或熱擊轉化，藍白斑篩選鑑定。
4、製作特異蛋白抗體，粗提蛋白液sds-page電泳，檢測雜交訊號。
剩下的不會。
原核表達時多大的蛋白好表達,原核生物中表達真核蛋白應該注意什麼問題
因為原核生物缺乏翻譯後的修飾,所以表達的真核蛋白和真核中表達有所差異內,可能沒容有生物學活性等,但是要是做免疫原應該沒問題 基因需為cdna,不能含有內含子,原核細胞不能對mrna進行剪下 要分析dna序列資訊,分析其密碼子,由於原核與真核生物的密碼子偏好性不同,所以有時可能會出現稀有密碼子而影響表...
原核表達中基因突變怎麼預防
一個基因 1 operon操縱子 一個或幾個結構基因與一個調節基因和一個操縱基因,加上啟動子構成一個操縱單元,這個單元稱為操縱子。在操縱子中,結構基因產生mrna並作為模板合成蛋白質 而調節基因則產生一種阻遏蛋白與操縱基因相互作用 阻遏蛋白與操縱基因結合從而阻礙了結構基因轉錄成為mrna 在誘導過程...
真核原核基因表達差異論述級別的題目！救命啊
原核生物沒有內含子，dna複製和轉錄相對較容易也比較簡單，調控幾乎完全由基因上游的rna聚合酶結合位點控制 而真核生物由於內含子的存在，有了 可變剪接 的可能，內含子也可以調控部分dna合成的問題，比如針對環境變化調整轉錄出的蛋白質的結構 組成等 另外，真核原核生物的核糖體也是不一樣的，其中蛋白質和...