1樓：犁半梅滕馳
望採納，因此半定量pcr時需要設定對照組。
4.保證反轉錄的效率。
5.rt-pcr需要做幾個重複孔，避免加樣的誤差。
6.所用的內參是否合適。
3，有什麼問題互相交流總結我所做的rt-pcr的經驗，提高半定量rt-pcr的可靠性或重複性需要注意的幾點.
提取rna前確保樣品的正確儲存，不能有降解。
2.提高rna的過程中避免rna酶的汙染引起rna部分降解.
提取的rna需要保證無基因組dna的汙染，因為管家基因的表達量只是相對保守，但視不同的處理方式會有變化。
希望能幫到你：1
2樓：柏米
半定量rt-pcr一般是在沒有條件做 實時pcr 的情況下使用，用於測定體內目的基因的表達增加減少與否，即通過目的基因跑出來的電泳帶與管家基因（如β-actin）的電泳帶的相對含量比較，觀測目的基因表達增減，另外還要做一個β-actin的內參照對照。
管家蛋白基因就是細胞內一些表達比較穩定的基因，如β-actin在各種細胞內的含量都穩定在10%左右。因此研究的目的基因的表達量與這些比較恆定含量的基因一比較，就可以觀察到目的基因是否隨著時間改變了~~~
半定量rt-pcr和定量rt-pcr的區別
3樓：陳災災
半定量rt-pcr與定量rt-pcr的區別是半定量rt-pcr操作簡便，可快速推測樣品中特異mrna的相對數量；而定量rt-pcb可實時定量，較半定rt-pcb更準確。
半定量反轉錄－聚合酶鏈反應（semi-quantitative reverse transcription and polymerase chain reaction ,sqrt-pcr）是近年來常用的一種簡捷、特異的定量rna測定方法，通過mrna反轉錄成cdna，再進行pcr擴增，並測定pcr產物的數量，可以推測樣品中特異mrna的相對數量。
定量rt-pcr（quantitative reverse transcription and polymerase chain reaction ,qrt-pcr）是在用一步法或兩步法，在pcr反應體系中加入熒光基團，利用熒光訊號積累實時監測整個pcr程序，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
4樓：柏米
半定量rt-pcr一般是在沒有條件做 實時pcr 的情況下使用，用於測定體內目的基因的表達增加減少與否，即通過目的基因跑出來的電泳帶與管家基因（如β-actin）的電泳帶的相對含量比較，觀測目的基因表達增減，另外還要做一個β-actin的內參照對照。
管家蛋白基因就是細胞內一些表達比較穩定的基因，如β-actin在各種細胞內的含量都穩定在10%左右。因此研究的目的基因的表達量與這些比較恆定含量的基因一比較，就可以觀察到目的基因是否隨著時間改變了~~~
pcr有全定量和半定量之分嗎？二者區別是什麼？
5樓：泰培勝王胭
有，基本是半定量。我們平時做的rt-pcr，可以說是半定量的，還有現在比較流行的
版real
time
pcr基本可以說是定權量的，其實也並不是非常非常準的，一般的pcr都是後定量，real
是前定量，是檢測沒一個迴圈的量故名的來的。一般都是sybr染色，再準確點的是taqman探針。具體你可以查一下。
做熒光定量pcr和半定量pcr有什麼區別?半定量的pcr退火溫度和熒光定量pcr是一樣的嗎?
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