RNA提取過程中氯仿萃取之後加無水乙醇析出沉澱太多,漂洗離心

2021-04-03 01:25:32 字數 2877 閱讀 2678

1樓:暮秋陽光

加完氯仿是用異丙bai醇析出rna,我們

du是用75%的乙醇zhi(用depc水來配)dao洗滌,乙醇是去各版種離子的,無水乙醇不能權去除離子,洗完之後一定要完全晾乾,然後加入適量的depc水,在60度中水浴,直至溶解,如果部分沉澱不能溶解,那可能是含有其他物質,你可以將溶解的部分吸到另一個滅菌的管子中,這部分應該是會有溶解有rna的。

rna提取中加入氯仿和異丙醇的原因

2樓:demon陌

作為有機溶劑變性蛋白,使其沉澱並通過離心除去,同時也通過變性作用抑制rnase活性。rna提取試劑中通常含有苯酚,苯酚微溶於水,抽提烷之後水相里有痕量的酚,如果不除去會損傷核酸,需要通過氯仿把水相里參與的苯酚抽提掉。

rna是以dna的一條鏈為模板,以鹼基互補配對原則,轉錄而形成的一條單鏈,主要功能是實現遺傳資訊在蛋白質上的表達,是遺傳資訊向表型轉化過程中的橋樑。

3樓:一二三

氯仿的作用有多個方面,一是作為有機溶劑變性蛋白,使其沉澱並通過離心除去,同時也通過變性作用抑制rnase活性;二是rna提取試劑中通常含有苯酚(trizol主要成分就是苯酚,很多自己配試劑提的方法也用苯酚,抽提蛋白時也會用到苯酚),苯酚微溶於水,抽提烷之後水相里有痕量的酚,如果不除去會損傷核酸,需要通過氯仿把水相里參與的苯酚抽提掉;三是作為溶劑抽提樣品中的一些脂溶性雜質(比如油脂、脂溶性色素等),起到一定除雜作用

rna提取的時候無水乙醇,75%乙醇,氯仿有哪些作用

4樓:北京索萊寶科技****

氯仿: rna脫離dna及蛋白,從混合液中層析到水相.水相中的rna可用異丙醇沉澱濃縮.

接著用異丙醇進行二次沉澱,隨後用乙醇洗滌沉澱,可去除所有殘留的蛋白質和無機鹽. rna樣品中如果含有無機鹽, 有可能對後續實驗操作中的一些酶促反應產生抑制作用。

5樓:夏侯雪經霜

可以。因為提取原理是用氯仿萃取rna,而rna不溶於酒精,但氯仿和酒精胡溶。可行的辦法是用大量的氯仿萃取,減少酒精的干擾,最後再用異丙醇沉澱。

rna提取原理

6樓:追尋複製者

rna抽取一般使用trizol法抽來提:

trizol是一種總自rna抽提試劑,內含異bai硫氰酸胍等物質,能du

迅速裂解細zhi胞,抑制細胞釋

dao放出的核酸酶活性。目前常用trizol法進行提取組織或細胞中的rna。

trizol作用原理:

在勻質化或溶解樣品中,trizol試劑可保持rna的完整性,同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心後,裂解液分層成水相和有機相。rna存在於水相中。

水相轉移後,rna通過異丙醇沉澱**。移去水相後,用乙醇可從中間相沉澱得到dna,加入異丙醇沉澱可從有機相得到蛋白質。

7樓:匿名使用者

dna不是單獨存在於細胞中的,是染色體

蛋白質是有機物沒錯,但是它是複雜的有機物,有親水基,疏水基,所以不是只要是有機物就溶於有機溶劑的

分層看的是密度,不是分子量的大小

8樓:《不能說的祕密

蛋白質在有機溶劑中復變性所以形成

制沉澱,中間那白bai色的是變性du的蛋白質。

我們做過zhi提取dna的實驗,dao用的是飽和酚提取的,後來又用了氯仿的。dna、rna很容易被分解,特別是rna,rna酶到處都有,我們在做dna提取時用到edta抑制dna酶的活性,防止被降解。

分層不是看分子的大小的,看它在離心力的作用下運動的快慢,一般密度大的運動的快一些在下面。

下層有機相中有一些脂類

提取rna的實驗中各個試劑的作用是什麼?

9樓:匿名使用者

trizol是裂解細胞 氯仿是萃取rna 異丙醇沉澱rna 最後用酒精清洗 雜質可能是萃取完取上層的時候引入的 也可能是操作過程中引入

10樓:匿名使用者

trizol主要物質是異硫氰酸胍,它可以破壞細胞使rna釋放出來的同時,保護rna的完整性 。加入氯仿後離心,樣品分成水樣層和有機層。rna存在於水樣層中。

收集上面的的水樣層後,rna 可以通過異丙醇沉澱來還原。在除去水樣層後,樣品中的dna 和蛋白也能相繼以沉澱的方式還原。乙醇沉澱能析出中間層的dna,在有機層中加入異丙醇能沉澱出蛋白。

11樓:匿名使用者

可能是家提取液或氯仿提取過程中出現問題,這兩個步驟比較關鍵,最後就是酒精要蒸乾

提取rna時,細胞裂解後加入氯仿的原因是什麼

triozl大量提取rna,該加氯仿時加成無水乙醇,還有的救嗎

12樓:匿名使用者

可以。因為提取原理是用氯仿萃取rna,而rna不溶於酒精,但氯仿和酒精胡溶。可行的辦法是用大量的氯仿萃取,減少酒精的干擾,最後再用異丙醇沉澱。

triozl大量提取rna,該加氯仿時加成無水乙醇,還有的救嗎? 10

13樓:此時情緒

再加相比之前更多一點的氯仿試試,我覺得乙醇更容易溶在氯仿裡,就算水相含有一些乙醇也應該不影響,因為後面還要加異丙醇沉澱rna。你試試看吧。

14樓:匿名使用者

我有點不理解,trizol法處理,勻漿,裂解細胞後,加氯仿的作用是會使溶液分成有機相和水相。rna算離子化合物,溶於水相,所以加了氯仿後按理說應該還是在水相里。你先加的無水乙醇這種有機溶劑,對氯仿溶液的分成的影響大不大我不確定,你可以試試。

15樓:匿名使用者

我覺得可以繼續加氯仿試試,應該還是在上清裡

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