抗性基因或標記基因在質粒上的話,它怎麼起到檢驗目的基因的作用?

2024-12-10 10:45:20 字數 3174 閱讀 5574

1樓:蒯鴻博華金

抗性基因或標記基因在質粒上是為了檢驗質粒是否被轉入菌體中。

如果你的質粒是已經構建好,而且鑑定正確的,沒有空載體質粒,那麼,當你轉化後,在篩選平板上轉化(因為轉化不是100%的效率,有些菌是沒有質粒轉入的),只有轉入了該質粒的菌才能長起來,也就意味著這菌是帶有你的目的基因。另外,抗性基因和標記基因(如營養缺陷基因)給予菌體以選擇壓力,有利於質粒在菌體內的大量擴增。

另一種情況,比如你做連線實驗,把目的基因片段和酶切質粒連線,這時,連線效率更不會是100%,當你把連線產物轉入感受態細菌,只要轉入了該質粒(無論是空載體還是陽性載體),菌都能長起來,沒轉入的就長不起來,起到第一步篩選。要篩選你的陽性轉殖,還需進一步檢驗,比如pcr或者提質粒酶切。

純屬手打,歡迎繼續討論,祝愉快!

2樓:豆其英磨香

你好我想我能做一番解釋。

首先是抗性基因是放在特定的條件下檢測的、所以有就能活,沒有就不能活。所以抗性基因是一種標記基因,有利於篩選含重組dna的細胞。對於你說的質粒上的基因對於大腸桿菌,極少數可以存活吧。

那種是發生了基因突變活基因重組。

希望你能!謝謝!

3樓:青睿聰甫若

如果是做基因轉殖的話,可以直接用藍(蘭)白斑篩選。一般的轉殖載體上有lac

z基因,在iptg和x-gal作用下能產生藍斑,而此基因中間有多轉殖位點,當你的片段基因插入時,把這個基因給破壞了,不能產生蘭斑,而只是產生白斑。這樣就區別開來,象puc18/19,pbr322等最常用的質粒都有lac

z基因。如果是想做基因表達,就沒有這樣好的方法了,只能是篩選,挑上十個斑,去小搖一回,做酶切,看大小(一般三五個會挑出乙個來,如果運氣實在不好,十個確定是會有乙個的)。大小對了再去測一下序。

測序正確,再進行下一步表達。

4樓:網友

你是概念弄混了 到hi上來 我跟你講。

質粒的選擇標記有哪些基因?

5樓:中國農業出版社

抗生素抗性基因是目前使用最廣泛的選擇標記。(1)氨苄青黴素抗性基因:氨苄青黴素抗性基因(ampicillin:

resistance:gene,emphasis:role=italicampsuperscriptrsuperscriptemphasis)是基因操作中使用最廣泛的選擇標記,絕大多數在大腸桿菌中轉殖的質粒載體帶有該基因。

它基因編碼一種酶,該酶可分泌進入細菌的周質區,抑制轉肽反應並催化β-內醯胺環水解,解除了氨苄青黴素的毒性,從而賦予含有該質粒的細菌在氨苄青黴素培養基上的抗性,實現選擇目的。

2)四環素抗性基因:四環素可與核醣體30s亞基的一種蛋白質結合,從而抑制核醣體的轉位。四環素抗性基因(tetracycline:

resistance:gene,emphasis:role=italictetsuperscriptrsuperscriptemphasis)編碼乙個由399個氨基酸組成的膜結合蛋白,可阻止四環素進入細胞。

pbr322質粒除了帶有氨苄青黴素抗性基因外,還帶有四環素抗性基因(link:xlinkhref=i010501圖4-3link)。

3)氯黴素抗性基因:氯黴素可與核醣體50s亞基結合並抑制蛋白質合成。目前使用的氯黴素抗性基因(chloramphenicol:

resistance:gene,emphasis:role=italiccmsuperscriptrsuperscript,catemphasis)**於轉導性p1噬菌體,編碼氯黴素乙醯轉移酶,在乙醯輔酶a存在的條件下,該酶催化氯黴素形成氯黴素羥乙醯氧基衍生物,使之不能與核醣體結合而使細菌存活。

4)卡那黴素和新黴素抗性基因:卡那黴素和新黴素是一種脫氧鏈黴胺氮基糖苷,都可與核醣體結合並抑制蛋白質合成。卡那黴素和新黴素抗性基因(kanamycinneomycin:

resistance:gene,emphasis:role=italickansuperscriptrsuperscriptemphasis)實際就是一種編碼氨基糖苷磷酸轉移酶(aminoglycoside:

phospho:transferase,aph,25ku)的基因,氨基糖苷磷酸轉移酶可使這兩種抗生素磷酸化,從而干擾了它們向細胞內的主動轉移。在細胞中合成的這種酶可以分泌至外周質腔,保護宿主不受這些抗生素的影響。

質粒中的抗生素合成基因等標記基因通常會用於含有目的基因受體細胞的篩選。這句話為什麼錯?

6樓:汪心妍

錯在抗生素合成基因,應該改為抗生素抗性基因。兩者相反了,乙個合成抗生素,乙個對 抗生素產生抗性。

接下來給你介紹抗生素抗性基因,作為標記基因。

舉例:大腸桿菌的某種質粒具有青黴素抗性基因(該基因可以認為是標記基因),當這種質粒與外源dna組合在一起形成重組質粒,並被轉入受體細胞後,就可以根據受體細胞是否具有青黴素抗性來判斷受體細胞是否獲得了目的基因。當人們用選擇培養基(比如含有青黴素的培養基),來培養受體細胞時,能夠在培養基中存活下來的受體細胞就可以認為是成功的匯入了外源dna,標記基因就起作用了。

7樓:沃然網路

應該改為:質粒中的抗生素抗性基因等標記基因通常會用於含有目的基因受體細胞的篩選。

8樓:匿名使用者

一般目的基因是連到帶有抗性基因的質粒上的,普通的大腸桿菌本身沒有抗性基因。 如果用含有抗生素的培養基培養,沒有匯入抗性基因質粒的大腸桿菌是不能存活的。匯入了帶抗性基因的質粒以後才能存活。

把目的基因連線到帶有抗性基因的質粒上以後,就可以根據抗性來篩選帶有該質粒的大腸桿菌,篩選出的大腸桿菌被認為是同時帶有了目的基因,即該菌中成功匯入了目的基因。

基因工程中,標記基因是位於質粒還是目的基因上? 標記基因起什麼作用?

9樓:匿名使用者

質粒,目的基因只含有所需表達的遺傳物質。

質粒上具有那些結構?質粒上的抗性基因的作用是什麼

10樓:淘歌

現代分子生物學實驗中用到的工程質粒,其重要功能序列基本包括:

複製起點:用於質粒dna複製;

啟動子:如lacz,用於質粒篩選或誘導插入片段基因轉錄;

抗性基因:主要用於篩選或給予抗性壓力以促進質粒擴增;

多轉殖位點:含多個限制酶切位點,用於外源片段插入;

終止子:終止轉錄。

報告基因:有些質粒帶有報告基因,如gfp基因。

為啥質粒上的標記基因至少要保留,為啥質粒上的標記基因至少要保留一個

保留一個以備篩選啊,要不然怎麼得到轉化成功的克隆。標記基因是不是在質粒上標記基因是不是一 基因工程中,來質粒上有標記基因。自標記基因是一bai種已知功能或已知序du列的基因,能夠zhi起著特異性標dao 記的作用。在基因工程意義上來說,它是重組dna載體的重要標記,通常用來檢驗轉化成功與否 在基因定...

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