1樓：樂研_統統
我幫你在ncbi查到il-1β的基因登入號了「nm_008361」。
你把這個登入號輸入到「primer premier」軟體中，根據你的要求修改設定就可以設計出引物了。
2樓：mb名牌
5'-ata agcccactctacacct3'；5'-attggccctgaaaggagaga-3'
rt-pcr產物電泳結果只有引物二聚體，沒有目的條帶，更換引物了也這樣，求高手解答原因啊！高分
3樓：匿名使用者
1. 樓上說的都很有道來理。不同的taq確實效果源很不bai一樣。
在我所使用du過的幾十種酶中，發現凡是遇到zhi困難的dao模板，qiagen 的hotstart master mix plus一般都可以得到產物，所以我強烈推薦（可以試試配合q solution一起使用，一般免費索取）
2. 另外就是，你的目標基因的表達量是不是很低？你的pcr目的是什麼？
建議先找一個表達丰度高的體系，驗證一下你的引物是否工作。對於極低表達丰度的目標，一輪pcr很有可能得不到產物，這是建議使用nested pcr，就是設計2套巢狀的引物，第一輪先用外面的那對，理論上可以得到一個比較大的產物（跑膠不一定能看到），然後稀釋pcr產物50倍，再用裡面那對引物擴一次，一般可以得到跑膠看得見的產物量。
3. 關於引物設計，推薦使用primer3 plus，這是免費的網上設計軟體，很好用。比你用的那2種引用次數多很多。你google一下就可以了。
4樓：紫電
個人覺得
抄mix質量一般，mix一般是襲用來做檢測用的，比如說提取出來了質粒做克隆鑑定啊，或者是轉基因動物做基因型鑑定用的。你要用cdna做模板的話，建議用專門的pcr的酶，這樣也可以改體系中的不同組分，比如說可以把mg離子濃度提高一些。
我建議你改用好一些的taq酶去pcr試試，比如說la taq，primer star或者pfu什麼的，保真度高。另外，你也可以試試把退火溫度再降低一下，你的退火溫度是在引物的tm值附近的嗎？
5樓：匿名使用者
不要用mix試試吧！
用taq dna buffer、dntps、mg2+、引物、taqdna聚合酶試試。
退火溫度在40到70度間都試試。可能是退火溫度已經太低了所以出現雜帶。
菜鳥提問：pcr法檢測某個已知基因，設計引物時，不p整個基因，只p一部分，要怎麼選擇這部分呢？
6樓：韓小霞
可能為突變或bai者非特異性
擴增du.首先排除測序問題zhi.測序沒有問題.重新擴dao增進行測版序看是否
為非特權異性擴增.不是的話可能存在突變.你也可以諮詢測序公司.至於設計引物直接選擇在測序結果的文字中挑選出來即可.使用文字格式.
7樓：匿名使用者
我覺得沒啥問題，肯定是陽性的，如果僅僅是檢測的話這個可以了
8樓：35豆豆
三個鹼基ggg會不會是你引物上的啊。。
9樓：匿名使用者
那要看你的pcr產物後續是要做什麼，如果只是驗證應該沒多大關係，但要是後續還要用這個產物繼續研究就不行了，要是這三個鹼基在orf區就會改變基因功能。
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