1樓:淵源
引物就是為了增幅目的dna而匯入的短小dn**斷,在pcr反應中,新合成的dna是要接在引物上才能繼續按照模版dna複製.引物的設計因需要增幅的序列而不同.舉個例子來說,你要增幅如下序列:
accctcccgccccccccgtat
(互補鹼基不寫了)
那麼一般來說,你就要匯入以accctc結尾的引物使得增幅繼續下去,具體方法和注意事項樓主可以看gee_an大俠的資料.
查了一下測序公司的網頁,如果要同定微生物,樓主需要準備如下東東:
1、待測菌體.試管或培養皿都可以,但必須是純粹的待測菌體,不能含有其他的微生物.
2、提純的dna.如果1有致病性或傳染性,那麼樓主就得自己提純dna再交給測序公司.dna純度要求可以做pcr.
2樓:澹臺彩榮書雁
在rcr中引物一般是一段dna序列,我們通常是通過在網上查詢出所需要的幾段序列,然後通過pcr來確定哪幾個引物最好。
3樓:邢以彤鐸驪
一小段寡聚的dna,一般有兩個(一對),分為上游引物和下游引物,分別指導dna兩條鏈的聚合。它們主要作用有兩個,一個是和模板特異性結合來指導taq聚合酶合成所要的片段。一個是提供一個3『端的-oh末端,只有擁有一個-oh末端,dna聚合酶才能合成dna。
在體內是由小段的rna來提供的,在體外pcr試驗中則用dna,因為dna比rna穩定易於儲存。
4樓:匿名使用者
是一段特定的dna序列,可以在退火溫度下和模版鏈特異性結合,引導pcr體系中的dntp根據與模版鏈鹼基配對原則延伸出一條新的鏈.引物的序列是根據你要擴增的dna序列而設計的.
5樓:匿名使用者
根據你需要擴增的dna序列設計的dn**段,大概就是magician13 說的那樣,在網上搜搜pcr,全明白的了
6樓:匿名使用者
這個東西你做一次pcr實驗就明白了。
pcr技術中「引物」是什麼?有什麼作用?引物需要複製嗎?
7樓:90阿
引物是一段短的單鏈rna或dn**段,可結合在核酸鏈上與之互補的區域,其功能是作為核苷酸聚合內作用容的起始點,核酸聚合酶可由其3′端開始合成新的核酸鏈。體外人工設計的引物被廣泛用於聚合酶鏈反應、測序和探針合成等。
引物是人工合成的兩段寡核苷酸序列,一個引物與感興趣區域一端的一條dna模板鏈互補,另一個引物與感興趣區域另一端的另一條dna模板鏈互補。
在pcr(聚合酶鏈式反應)技術中,已知一段目的基因的核苷酸序列,根據這一序列合成引物,利用pcr擴增技術,目的基因dna受熱變性後解鏈為單鏈,引物與單鏈相應互補序列結合,然後在dna聚合酶作用下進行延伸,如此重複迴圈,延伸後得到的產物同樣可以和引物結合。 pcr引物設計的目的是找到一對合適的核苷酸片段,使其能有效地擴增模板dna序列。如前述,引物的優劣直接關係到pcr的特異性與成功與否。
對引物的設計不可能有一種包羅永珍的規則確保pcr的成功,但遵循某些原則,則有助於引物的設計。
8樓:匿名使用者
pcr技術中「引物」是一小段dna,其作用是:作為dna複製的起點,當一次複製完成後,引物也不到了一條鏈上,下次複製時,引物也需複製。
9樓:大地君
引物就是一段dna啊,能讓dna聚合酶識別並在引物後進行鹼基互補配對。需要的
pcr中,引物是什麼意思?
10樓:淵源
引物就是為了增幅bai目的dna而導du入的短小dn**斷,在zhipcr反應中,新合成的dna是要接在引dao物上才能繼續按照模
專版dna複製屬.引物的設計因需要增幅的序列而不同.舉個例子來說,你要增幅如下序列:
accctcccgccccccccgtat
(互補鹼基不寫了)
那麼一般來說,你就要匯入以accctc結尾的引物使得增幅繼續下去,具體方法和注意事項樓主可以看gee_an大俠的資料.
查了一下測序公司的網頁,如果要同定微生物,樓主需要準備如下東東:
1、待測菌體.試管或培養皿都可以,但必須是純粹的待測菌體,不能含有其他的微生物.
2、提純的dna.如果1有致病性或傳染性,那麼樓主就得自己提純dna再交給測序公司.dna純度要求可以做pcr.
高中生物pcr技術擴增的是兩引物之間的核苷酸序列是什麼意思
11樓:匿名使用者
首先有一段雙鏈模板dna,根據模板dna兩端的序列設計兩條引物,每條引物與其中一條鏈互補。如下圖所示。
引物1-->
5『 *********x 3』
3『 *********x 5』
<--- 引物2
在pcr反應過程中,每條引物結合一條模板dna鏈,從5『-3』方向開始擴增,所以最後擴增得到的序列就只能是在兩條引物之間的序列。可以找一些原理圖看一下,就比較容易理解了。
12樓:匿名使用者
pcr技術中擴增的是兩引物之間的核苷酸序列,意思是採用該技術,可以大量擴增引物之間的序列,一般情況下,我們需要大量的某一基因的片段時,我們在基因的兩端分別設計引物(一段一條),然後在體外,採用pcr的方法,用引物進行體外dna複製,從而大量合成引物之間的基因。
pcr即聚合酶鏈式反應是一種用於放大擴增特定的dn**段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊dna複製,pcr的最大特點,是能將微量的dna大幅增加。
其原理為:
dna的半保留複製是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈dna在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈,在dna聚合酶的參與下,根據鹼基互補配對原則複製成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現,dna在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。
因此,通過溫度變化控制dna的變性和復性,加入設計引物,dna聚合酶、dntp就可以完成特定基因的體外複製。
但是,dna聚合酶在高溫時會失活,因此,每次迴圈都得加入新的dna聚合酶,不僅操作煩瑣,而且**昂貴,制約了pcr技術的應用和發展。
耐熱dna聚合酶--taq酶的發現對於pcr的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個迴圈加酶,使pcr技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,pcr技術得以大量應用,並逐步應用於臨床。
pcr技術的基本原理類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:①模板dna的變性:
模板dna經加熱至93℃左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;②模板dna與引物的退火(復性):模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55℃左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;③引物的延伸:dna模板--引物結合物在72℃、dna聚合酶(如taqdna聚合酶)的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基互補配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈,重複迴圈變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。
每完成一個迴圈需2~4分鐘,2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
pcr引物到底是什麼?在pcr過程中起什麼作用?
13樓:浦恨真汝嬋
pcr技術中的引物的
bai本質和作用。du
引物是一小
zhi段單鏈dna或rna,引物可以做為daodna複製專開始時dna聚合酶的結合位屬點,在細胞外的條件下,只有通過引物,dna才可以開始進行復制。
引物是人工合成的兩段寡核苷酸序列,一個引物與感興趣區域一端的一條dna模板鏈互補,另一個引物與感興趣區域另一端的另一條dna模板鏈互補。
啟動子和引物兩者的區別:
啟動子是dna分子上能與rna聚合酶結合並形成轉錄起始複合體的區域,在許多情況下,還包括促進這一過程的調節蛋白的結合位點,決定rna聚合酶轉錄起始位點的dna序列。
引物是一小段單鏈dna或rna,引物可以做為dna複製開始時dna聚合酶的結合位點,在細胞外的條件下,只有通過引物,dna才可以開始進行復制。引物是人工合成的兩段寡核苷酸序列,一個引物與感興趣區域一端的一條dna模板鏈互補,另一個引物與感興趣區域另一端的另一條dna模板鏈互補。
啟動子是位於結構基因前的非編碼區對轉錄起調控作用的一段dna序列。引物則是遊離於dna複製的模板鏈之外的對dna複製起調控作用的一小段單鏈dna或rna。
14樓:陀芷天鈔彭
通俗的講,引物就是為了增幅目的dna而匯入的短小dn**斷,在pcr反應中,新合成的dna是要接在引物上才能繼續按照模版dna複製。引物的設計因需要增幅的序列而不同。
15樓:卿天亦逮季
我是bai高中生(至少三個du月以前還是)所zhi以我所說的你大概可以dao理解
pcr的意思是聚合內酶鏈式反應,是容一種擴增dna的技術(就是複製dna)
dna複製其實很複雜,dna聚合酶有一種特性,他只能把脫氧核糖核酸接到一段現有的dna或rna上,這樣你就能明白了吧。第一個位置上的脫氧核糖核酸沒辦法弄到了。在人體內這個部分是由rna聚合酶完成的,先由這個酶在基因的第一段複製出一小段rna,然後再由dna聚合酶在後面添上以後的dna。
這段rna就叫rna引物。等都填完後再由引物酶把這段rna切掉換成dna(這種做法有一個毛病,會引起5'端縮短,不過你不需要理解)
pcr中可以用已經合成的dna引物來代替rna引物。這些就是引物的作用
16樓:朋珍瑞潮靖
。。。高中。抄。。現
在高中生物還有pcr啊。。。真高階
引物就是一段小的dn**段,作用麼,簡單的說就是定位的作用,讓pcr知道該p哪一段dna咯~
就好比是一條很長的鎖鏈,你只想要得到中間的某一段,頭上的和尾上的多於部分都是不需要的,你要告訴生產廠家你要的那段的位置,他們才能幫你準確的複製你想要的那段,所以你就需要兩個小片段,在你要的那段兩端做上標記,以方便廠家確認位置,但這兩端標記呢,又不是隨便找的,而是和你要的那小段的兩端是一樣的,這樣廠家就能根據這兩端,再加上整條鏈子的特性來幫你生產複製你需要的那段了。pcr的引物起的就是這個作用。
不知道比喻的是否準確。。。希望你能明白。。。
pcr引物設計為什麼要引入酶切位點
為了連入相應的載體,通過載體可以表達目的基因 你擴增的片段 有些實驗需要pcr之後酶切與載體連線。這個不是必須的,要看你的實驗要求。加酶切位點的目的是方便進行下面的克隆 如果你只是用於pcr鑑定等,新增酶切位點反而不好。構建質粒載體中用pcr獲得目的基因,其中涉及的引物為什麼要加酶切位點?難道不論載...
RT PCR與時時PCR的原理及引物有什麼區別
rt pcr和一般的pcr相比原理上沒有太多的區別,無非就是在反轉時候rna的定量,不同模板的設定。對引物沒有特別的要求,能特異代表目的基因就行。real time pcr根據原理的不同,引物選擇也不同。通常用的是sybr green的方法,這種方法引物在rt pcr的基礎上需要注意 1.退火溫度同...
基因工程與PCR技術的異同點,PCR技術和基因工程的優缺點分別是什麼
pcr反應的基本成分包括 模板dna 待擴增dna 引物 4種脫氧核苷酸 dntps dna聚合酶和適宜的緩衝液。類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。pcr由變性 退火 延伸三個基本反應步驟構成 1模板dna的高溫變性 模板dna經加熱至93 C左右一定時間後,...