1樓:匿名使用者
蛋白提取時使用蛋白裂解液將細胞裂解,然後離心分為上清液和下層沉澱版,如果你說的是這個上清液的話權,那麼這個上清液是細胞中的可溶性蛋白,一般包括細胞質的蛋白和細胞核的可溶性蛋白,下層沉澱主要是細胞碎片以及不可溶的蛋白以及染色質之類的。
細胞水煮裂解做western好嗎
2樓:我痛得多漂亮
蛋白提取時使用蛋白裂解液將細胞裂解,然後離心分為上清液和下層沉澱,如果你說的是這個上清液的話,那麼這個上清液是細胞中的可溶性蛋白,一般包括細胞質的蛋白和細胞核的可溶性蛋白,下層沉澱主要是細胞碎片以及不可溶的蛋白以及染色質之類的。
做wb,直接收集細胞沉澱凍起來可以嗎
3樓:聽風
做wb,可以直接收集細胞沉澱凍起來,以備下一步實驗所用。
蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即western blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。
通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的資訊。比如加藥物處理的貼壁細胞總蛋白的提取。
由於受藥物的影響,一些細胞脫落下來,所以應收集培養液中的細胞。以下是培養液中細胞總蛋白的提取:
1 將培養液倒至15ml離心管中,於2500rpm離心5min。
2棄上清,加入4ml pbs並用槍輕輕吹打洗滌,然後2500rpm離心5min。棄上清後用pbs重複洗滌一次。
3用槍洗幹上清後,加100 μl裂解液(含pmsf)冰上裂解30min,裂解過程中要經常彈一彈以使細胞充**解。
4將裂解液與培養瓶中裂解液混在一起4°C、12000rpm離心5min,取上清分裝於0.5ml離心管中並置於-20°C儲存。
有用細胞培養液的上清做western的嗎
4樓:匿名使用者
沒有影響,最後讀值時的吸收值和你細胞培養液顏色又不是一個步驟
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